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FPLC蛋白纯化堵柱子？
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使用FPLC纯化His-tag标记的重组蛋白时，1ml的GE的镍柱总被蛋白粗提液堵住，求解.. 上样前处理操作步骤如下， 2L的Ecoli培养物，超声破碎，12,0000g离心1h，0.45um的膜过滤，滤液上HPLC。然后还会堵柱子。已重复两次，哪位大侠可以给个合理解释？ |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+5): 很热心 2011-10-19 12:26:54
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+5): 很热心 2011-10-19 12:26:54
| 楼主遇到的问题基本上是属于原核表达系统的共性问题，具体原因很多，这也跟你的实验中加入物质及加入物质的浓度有关。原核表达破碎后离心可以去除一定的颗粒，但常常放置一段时间后还会有沉淀生成，所以建议在离心后放置于冰箱中使之冷却至后再过滤，这样沉淀会完全些，还有如果这样还不行可以考虑稀释样品，当样品被稀释后就不容易形成沉淀了。还有一种可能是楼主在离心破碎后过滤了一次，然后再调整溶液pH、电导等参数，改变了原来的平衡，使一些杂质析出这都是有可能的。就说这么多吧 |
19楼2011-10-17 16:03:59
2楼2011-10-11 21:32:10
3楼2011-10-11 21:38:39
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
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专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
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4楼2011-10-11 23:39:25
200