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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质表达沉淀如何定量？
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pidou213

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白质表达沉淀如何定量？

蛋白质表达，酵母破碎后，沉淀中的蛋白质如何定量？
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见得多爱的多
1楼 2011-10-11 12:07:45
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

pidou213(金币+2): 谢谢 2011-10-11 23:02:31
引用回帖:
1楼: Originally posted by pidou213 at 2011-10-11 12:07:45:
蛋白质表达，酵母破碎后，沉淀中的蛋白质如何定量？

试试相对定量，用SDS-Page胶跑完后，拿具体浓度的BSA作为对照，对比条带亮度，软件分析即可
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在等待中涅槃重生
2楼2011-10-11 13:06:32
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gaolandragon

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

请问为啥要定量呢？
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Never_regret.If_it's_good,it's_wonderful.If_it's_bad,it's_experience.
3楼2011-10-11 14:01:25
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-10-11 13:06:32:
试试相对定量，用SDS-Page胶跑完后，拿具体浓度的BSA作为对照，对比条带亮度，软件分析即可

还是有道理的，但是那样太麻烦啦
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见得多爱的多
4楼2011-10-11 23:02:09
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaolandragon at 2011-10-11 14:01:25:
请问为啥要定量呢？

做蛋白的时候不定量的话 怎么能说明问题呢？
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见得多爱的多
5楼2011-10-11 23:03:02
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by pidou213 at 2011-10-11 23:02:09:
还是有道理的，但是那样太麻烦啦

用凯氏定氮法更麻烦！
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真相是最大的奢侈品
6楼2011-10-12 09:11:31
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sfb1020

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-13 12:29:08
在沉淀中加上样缓冲液，煮沸，离心，取上清用lowry法定量，我们实验室就是这么做的。蛋白上样缓冲液网上有配方。
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7楼2011-10-12 11:15:50
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sfb1020 at 2011-10-12 11:15:50:
在沉淀中加上样缓冲液，煮沸，离心，取上清用lowry法定量，我们实验室就是这么做的。蛋白上样缓冲液网上有配方。

取上清的话，那岂不是还是需要将蛋白溶解在缓冲液中才行。可是我的蛋白是膜蛋白，我觉得蛋白恐怕不溶解在上样缓冲液中啊
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见得多爱的多
8楼2011-10-13 00:08:03
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xiaoshidemei

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-13 12:29:21
用BCA法就可以测定
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-10-13 11:23:29
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