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bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): Good!热心!专业! 2011-10-03 10:58:12
你这说的很模糊,问题很多!
    质粒电泳未必能分析出结果,你的外源片段大小有多少,如果1Kb左右的片段,连接在5Kb的载体上,电泳时可能看不出差别,质粒在环状时电泳图谱不一定准确。推荐几种分析方法:
    1. 可以酶切载体,再以没有连接外源片段载体的酶切产物作对照;
    2. 菌落PCR,直接以菌体做PCR。常见的载体上都有通用引物,如M13F、M13R、T7、Sp6等,可以和你目的片段引物配对,以菌体为模板进行PCR,这个也可以以没有外源片段的载体作对照;
    3. 菌体电泳,直接用碱裂解法的溶液I和溶液II裂解菌体后,进行电泳, 以没有外源片段的载体作对照,条带相对滞后样品就是应该是连入外源片段的。
    通过这几种方法筛选到的阳性克隆,直接以菌体送去测序公司测序分析。你所要的阳性克隆,最终还是要通过测序结果的序列分析确定。
    希望对你有帮助,祝你成功。
5楼2011-10-03 10:54:35
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