应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒转染成功后质粒小提出现了问题
51/1返回列表
查看: 2082  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

bolomeer

铜虫 (小有名气)

[交流] 质粒转染成功后质粒小提出现了问题 已有4人参与

我在做实验的时候，经过质粒转染，细菌能够在选择性平板上存活，但是质粒小题后电泳，发现外源基因的条带消失了，本人用的宿主细菌叫DH5a，a是阿尔法，质粒也是该细菌自身的质粒，外源基因有两段，经过拼接后插入到质粒中，请问造成外源基因条带消失的原因有哪些？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-10-02 21:56:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): Good！热心！专业！ 2011-10-03 10:58:12
你这说的很模糊，问题很多！
    质粒电泳未必能分析出结果，你的外源片段大小有多少，如果1Kb左右的片段，连接在5Kb的载体上，电泳时可能看不出差别，质粒在环状时电泳图谱不一定准确。推荐几种分析方法：
    1. 可以酶切载体，再以没有连接外源片段载体的酶切产物作对照；
    2. 菌落PCR，直接以菌体做PCR。常见的载体上都有通用引物，如M13F、M13R、T7、Sp6等，可以和你目的片段引物配对，以菌体为模板进行PCR，这个也可以以没有外源片段的载体作对照；
    3. 菌体电泳，直接用碱裂解法的溶液I和溶液II裂解菌体后，进行电泳， 以没有外源片段的载体作对照，条带相对滞后样品就是应该是连入外源片段的。
    通过这几种方法筛选到的阳性克隆，直接以菌体送去测序公司测序分析。你所要的阳性克隆，最终还是要通过测序结果的序列分析确定。
    希望对你有帮助，祝你成功。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-10-03 10:54:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 有道理！ 2011-10-03 10:55:46
提质粒时是否有对照？
先检查是否你的提取是成功的哈。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-10-03 07:32:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jialiang310

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+2): 鼓励交流！ 2011-10-03 10:59:08
你的选择性平板是不是有问题，在就是提质粒时可能出现问题，我帮人做实验时没出现过这种状况
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-10-03 08:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-10-03 10:58:54
这个嘛，细节还需要说一下。
你的质粒是酶切后电泳？然后目的基因与质粒的分子量比是多少？
赞一下(2人) 回复此楼
一直向前！
4楼2011-10-03 09:26:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +8 ziyangfang 2026-08-25 11/550 2026-09-01 09:51 by zzuzxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭