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zxd95

至尊木虫 (著名写手)


[交流] 激光共聚焦显微镜观察烟草中的GFP蛋白

上学期做了转录因子基因与EYFP的融合表达载体,现在有了转基因植物,基因组PCR也检测到了基因,再进行RT-PCR进行验证。下面就要进行YFP的荧光观察,但是我没有做过这方面的实验。请使用过激光共聚焦显微镜观察过荧光蛋白的虫友进行指导。听说直接观察烟草叶片就可以了?是这样吗?
此外,观察前要对转基因烟草叶片进行怎样的处理,取什么时期或什么部位的叶片(幼叶片还是老叶片)?怎样观察?观察一个样片的价格一般是多少?
谢谢了!
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youzhi-l

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
还没有做过亚细胞定位的实验没法回答你的问题,但是看到你的内容想问下你关于基因组PCR的问题。我自己一直在做转基因烟草的鉴定工作,但是始终不能得到合适的结果,就是我用全世金公司的supermix酶扩增出来很多非特异条带,直到60度时才能得到单一条带,可是我设计引物的理论退火温度是50度
7楼2014-11-05 12:58:16
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w2boluo

金虫 (小有名气)



zxd95(金币+1):谢谢参与
zxd95(金币+1): 谢谢,看来普通荧光显微镜只能使用原生质体了;我是看定位的。 2011-10-02 23:14:45
建议先用一般的荧光显微镜对转基因株系进行筛选。荧光产率在不同line中相差较大。
转录因子融合gfp一般也就是看个核定位,普通荧光显微镜足够。
叶片直接撕去下表皮,切小块泡在液体培养基或者缓冲液中就可以镜检。如果想获得较好的图像,可以考虑将叶肉细胞原生质化。
3楼2011-10-02 20:18:28
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vcvcvc

木虫 (著名写手)


★ ★
zxd95(金币+1):谢谢参与
zxd95(金币+1): 谢谢,是看蛋白的亚细胞定位的! 2011-10-03 18:27:33
西瓜(金币+1): good! 2011-10-04 00:42:02
不是质体定位的话,直接敲根尖。否则要游离原生质体
4楼2011-10-03 12:04:42
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zxd95(金币+1):谢谢参与
zxd95(金币+1): 我在昆明,是昆明理工大学的! 2011-10-04 10:43:27
不知道你在哪儿,我们可以帮你看;你那个是植物细胞,很好看的!呵呵
5楼2011-10-03 22:58:14
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