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zxd95

至尊木虫 (著名写手)

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[交流] 激光共聚焦显微镜观察烟草中的GFP蛋白

上学期做了转录因子基因与EYFP的融合表达载体，现在有了转基因植物，基因组PCR也检测到了基因，再进行RT-PCR进行验证。下面就要进行YFP的荧光观察，但是我没有做过这方面的实验。请使用过激光共聚焦显微镜观察过荧光蛋白的虫友进行指导。听说直接观察烟草叶片就可以了？是这样吗？
此外，观察前要对转基因烟草叶片进行怎样的处理，取什么时期或什么部位的叶片（幼叶片还是老叶片）？怎样观察？观察一个样片的价格一般是多少？
谢谢了！

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youzhi-l

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1楼 2011-10-02 17:07:20

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15031534122

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by w2boluo at 2011-10-02 20:18:28
建议先用一般的荧光显微镜对转基因株系进行筛选。荧光产率在不同line中相差较大。
转录因子融合gfp一般也就是看个核定位，普通荧光显微镜足够。
叶片直接撕去下表皮，切小块泡在液体培养基或者缓冲液中就可以镜检 ...

取下表皮直接观察的时候叶绿体的自发荧光干扰比较大，怎么可以出去呢？