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碱裂解法提质粒之怪现象
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tianhuijuan
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虫号: 995868
[交流]
碱裂解法提质粒之怪现象
如题,最近一直在做克隆,质粒提取经常出现同样的问题:同样的实验操作,之前有提取出来,最近几次都是失败,电泳检测无条带出现,其中有时会有RNase消化后浑浊,离心有不溶物的现象。用了鼎国质粒快速提取试剂盒提取,同样无结果,师姐说是不是实验室摇床出问题了... 虫友们帮忙支支招,谢谢啦~
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2011-09-26 16:10:00
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tianhuijuan
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12楼
:
Originally posted by
adslye
at 2011-09-30 17:04:51:
A.花点时间设计阴阳性对照排除各种可能,比如:
1.找一个实验室别人的菌,肯定有质粒的。用现有试剂提一遍。排除:试剂和手法问题。
2.如果1中提出来了,说明是菌的问题。
2.1还有没有保种的菌?有的话,拿来 ...
多谢版主高见!
也祝十一快乐哈!
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13楼
2011-09-30 18:53:08
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nnxqwei
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tianhuijuan(金币+10): 2011-09-26 18:24:12
adslye(金币+2): 鼓励交流~国庆快乐~ 2011-09-30 16:52:34
1.首先确定你培养的菌有没有问题,确定它还有质粒吗?
2.试剂盒各溶液确定没有问题吗?
3.操作过程有没有出问题?
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2楼
2011-09-26 18:01:36
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tianhuijuan
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2楼
:
Originally posted by
nnxqwei
at 2011-09-26 18:01:36:
1.首先确定你培养的菌有没有问题,确定它还有质粒吗?
2.试剂盒各溶液确定没有问题吗?
3.操作过程有没有出问题?
首先谢谢你的意见。我培养的菌是实验室冻存的,没问题,之前提出来过,同时新转化了一批同样的质粒,提质粒也没结果,因该不是菌的问题;试剂盒也是先前用过的,可能会过期,但是与手提结果一样,估计也没问题吧;操作过程已经很是注意了,每一步都很小心的,实在想不出哪里的原因了..
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3楼
2011-09-26 18:23:58
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adslye(金币+2): 很热心~ 2011-09-30 16:53:06
1.质粒有多大,它的拷贝数大吗?它在宿主中稳定吗?
2.如果质粒在宿主是稳定存在,不可能提不出来吧。。。
3.“操作过程已经很是注意了,每一步都很小心的”如果你的洗液用久了,又没盖好的话,乙醇挥发了,是提不出质粒的。。。
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4楼
2011-09-26 18:47:41
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