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tianhuijuan

金虫 (小有名气)

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[交流] 碱裂解法提质粒之怪现象

如题，最近一直在做克隆，质粒提取经常出现同样的问题：同样的实验操作，之前有提取出来，最近几次都是失败，电泳检测无条带出现，其中有时会有RNase消化后浑浊，离心有不溶物的现象。用了鼎国质粒快速提取试剂盒提取，同样无结果，师姐说是不是实验室摇床出问题了... 虫友们帮忙支支招，谢谢啦~

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1楼 2011-09-26 16:10:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

A.花点时间设计阴阳性对照排除各种可能，比如：
1.找一个实验室别人的菌，肯定有质粒的。用现有试剂提一遍。排除：试剂和手法问题。
2.如果1中提出来了，说明是菌的问题。
2.1还有没有保种的菌？有的话，拿来摇起来，提一下。
2.2用别的保种的菌做阳性对照，与自己的菌一起摇，排除培养问题。
等等，做一个系统的规划，就不会乱了。

B.提质粒出问题，好久没见过了。没必要为这种实验浪费时间。
有个快捷方法：请隔壁实验室的MM吃顿饭，让她用她的试剂帮你提一遍。
如果提不出，基本确定是菌的问题了，估计还是很严重的问题。

祝好运，十一快乐。