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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DGGE高手请进，求指导！
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phonwa

银虫 (小有名气)

[求助] DGGE高手请进，求指导！

tuzi27:最近做DGGE遇到一些问题，请各位大侠帮忙分析下原因！
前面三个图片分别：第一张是DNA提取的电泳图，用试剂盒提取的土壤DNA。第二章图片是PCR扩增的图片，大小大概是900+bp，第三张是用第一次扩增出来的DNA再次扩增的图片，细菌的V3区，大小200+bp。这是PCR图片。之后的是DGGE图片。80V 14h ,电泳前200V，35min预电泳。第四张是，银染图片，第五张是SYBR green 1 染的图片。
请各位高手指点一下，是咋回事。迷茫了一周。
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1楼 2011-09-22 16:29:25
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girlfisher

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

phonwa(金币+3): 2011-09-24 15:50:42
带GC clamp了吗？
为什么要做巢式PCR，严重bias，是为了减少污染问题？
电泳时间减少有利于条带清晰度
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4楼2011-09-24 09:02:42
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phonwa

银虫 (小有名气)
忘说了，变形范围是35%-65%
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2楼2011-09-22 16:30:14
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phonwa

银虫 (小有名气)
没人看啊，帮个忙啊，各位大侠！
唉
自己顶起！
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3楼2011-09-23 17:04:13
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phonwa

银虫 (小有名气)
带了GC clamp，就是引物是半年前合成的，之前因为各种原因，没地做DGGE！
不是为了减少污染
就是为了减少非特异性扩增
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5楼2011-09-24 15:52:52
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