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tutufei

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒线性化对后续酶切有影响吗

提出来的质粒放四度几天发现大部分超螺旋变成线性,会对双酶切有影响吗?
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-23 12:39:06
tutufei(金币+5): 谢谢 2011-09-27 20:46:34
碱法抽提质粒中不含线性DNA,
三条带分别是超螺旋、开环和复制中间体
您说的线性其实是开环的质粒
从你的双酶切(两个酶之间应该相差很少,因为从你的双酶切图上只看到一条带)也能看出来,线性和你说的线性质粒的位置是有差别的。
10楼2011-09-23 04:42:00
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小鸟剑客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): Good! 2011-09-22 11:47:57
我也做过这个,应该会影响的,下次你放-20度吧,-4度不保险的!但是不知道你怎么知道超螺旋消失,至于变成线性我觉得不太可能吧,应该还是环状的吧。建议重提下
2楼2011-09-22 09:05:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

amisking: 鼓励应助。 2011-09-22 19:54:16
引用回帖:
1楼: Originally posted by tutufei at 2011-09-22 08:55:38:
提出来的质粒放四度几天发现大部分超螺旋变成线性,会对双酶切有影响吗?

就四度放着超螺旋变成线性,楼主搞错了吧?
3楼2011-09-22 09:51:55
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-09-22 12:32:26
用的试剂盒抽提的质粒么 我觉得不会出现这种情况 不行就重新抽质粒吧双酶切肯定有影响啊、
冷风过心变热
4楼2011-09-22 12:07:57
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