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1楼 2011-09-22 08:55:38

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小鸟剑客

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wanhscn(金币+2): Good！ 2011-09-22 11:47:57

我也做过这个，应该会影响的，下次你放-20度吧，-4度不保险的！但是不知道你怎么知道超螺旋消失，至于变成线性我觉得不太可能吧，应该还是环状的吧。建议重提下

2楼2011-09-22 09:05:24

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lxj341401

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amisking: 鼓励应助。 2011-09-22 19:54:16

引用回帖:

1楼: Originally posted by tutufei at 2011-09-22 08:55:38:
提出来的质粒放四度几天发现大部分超螺旋变成线性，会对双酶切有影响吗？

就四度放着超螺旋变成线性，楼主搞错了吧？

3楼2011-09-22 09:51:55

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清风寨

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dhd997(金币+2): 鼓励 2011-09-22 12:32:26

用的试剂盒抽提的质粒么我觉得不会出现这种情况不行就重新抽质粒吧双酶切肯定有影响啊、

冷风过心变热

4楼2011-09-22 12:07:57

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tutufei

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2楼: Originally posted by 小鸟剑客 at 2011-09-22 09:05:24:
我也做过这个，应该会影响的，下次你放-20度吧，-4度不保险的！但是不知道你怎么知道超螺旋消失，至于变成线性我觉得不太可能吧，应该还是环状的吧。建议重提下

原来超螺旋位置的条带变淡，线性位置的条带增亮了

5楼2011-09-22 14:43:45

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5楼: Originally posted by tutufei at 2011-09-22 14:43:45:
原来超螺旋位置的条带变淡，线性位置的条带增亮了

不太清楚你的意思，你应该传个图上来

6楼2011-09-22 15:36:10

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空谷幽风

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上图吧，还是亲眼看到图片更有助于给你提供好的建议

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7楼2011-09-22 15:39:35

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zc10052157

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超螺旋变成线性这个怎么看出来的啊

hold住

8楼2011-09-22 19:43:14

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tutufei

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质粒为6273bp，酶切后6242bp，图1为第一次预酶切与质粒对照图，图2为第二次酶切，发现质粒的超螺旋条带变淡，是不是线性化了？

9楼2011-09-22 22:40:08

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xiaoweiwei121

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dhd997(金币+3): good 2011-09-23 12:39:06
tutufei(金币+5): 谢谢 2011-09-27 20:46:34

碱法抽提质粒中不含线性DNA，
三条带分别是超螺旋、开环和复制中间体
您说的线性其实是开环的质粒
从你的双酶切（两个酶之间应该相差很少，因为从你的双酶切图上只看到一条带）也能看出来，线性和你说的线性质粒的位置是有差别的。