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tutufei

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒线性化对后续酶切有影响吗

提出来的质粒放四度几天发现大部分超螺旋变成线性，会对双酶切有影响吗？
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1楼2011-09-22 08:55:38
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小鸟剑客

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): Good！ 2011-09-22 11:47:57
我也做过这个，应该会影响的，下次你放-20度吧，-4度不保险的！但是不知道你怎么知道超螺旋消失，至于变成线性我觉得不太可能吧，应该还是环状的吧。建议重提下
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2楼2011-09-22 09:05:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

amisking: 鼓励应助。 2011-09-22 19:54:16
引用回帖:
1楼: Originally posted by tutufei at 2011-09-22 08:55:38:
提出来的质粒放四度几天发现大部分超螺旋变成线性，会对双酶切有影响吗？

就四度放着超螺旋变成线性，楼主搞错了吧？
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3楼2011-09-22 09:51:55
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-09-22 12:32:26
用的试剂盒抽提的质粒么 我觉得不会出现这种情况 不行就重新抽质粒吧双酶切肯定有影响啊、
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冷风过心变热
4楼2011-09-22 12:07:57
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tutufei

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鸟剑客 at 2011-09-22 09:05:24:
我也做过这个，应该会影响的，下次你放-20度吧，-4度不保险的！但是不知道你怎么知道超螺旋消失，至于变成线性我觉得不太可能吧，应该还是环状的吧。建议重提下

原来超螺旋位置的条带变淡，线性位置的条带增亮了
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5楼2011-09-22 14:43:45
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小鸟剑客

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tutufei at 2011-09-22 14:43:45:
原来超螺旋位置的条带变淡，线性位置的条带增亮了

不太清楚你的意思，你应该传个图上来
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6楼2011-09-22 15:36:10
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

上图吧，还是亲眼看到图片更有助于给你提供好的建议
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2011-09-22 15:39:35
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zc10052157

新虫 (正式写手)
超螺旋变成线性这个怎么看出来的啊
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hold住
8楼2011-09-22 19:43:14
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tutufei

铜虫 (小有名气)
质粒为6273bp，酶切后6242bp，图1为第一次预酶切与质粒对照图，图2为第二次酶切，发现质粒的超螺旋条带变淡，是不是线性化了？
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9楼2011-09-22 22:40:08
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-23 12:39:06
tutufei(金币+5): 谢谢 2011-09-27 20:46:34
碱法抽提质粒中不含线性DNA，
三条带分别是超螺旋、开环和复制中间体
您说的线性其实是开环的质粒
从你的双酶切（两个酶之间应该相差很少，因为从你的双酶切图上只看到一条带）也能看出来，线性和你说的线性质粒的位置是有差别的。
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10楼2011-09-23 04:42:00
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