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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我做酶切电泳自制marker开始都挺好，后来跑不开了。
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kuangxia

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我做酶切电泳自制marker开始都挺好，后来跑不开了。

我用Alu1，酶切pFCB-31来制作marker。酶切24小时后，靠点样孔出现了9条带，目的是出现20条带。又加入10u酶切后，出现了所需的20条带。加入loading buffer和EDTA常温下保存，过了个周末后再来电泳的时候，全在一起了，分不开了，聚集在距点样孔较远的地方，拖带拖在一起了，后来再跑，也都跑不出来了。
实验方法和条件是正确的，因为我后来又重做了marker的，一样的保存方式，现在用起来很正常，20条带。
请问各位，出现上面那种情况有哪些可能，谢谢！
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1楼 2011-09-21 08:38:21
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
自己做marker，好牛啊，共享下protocol啊
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2楼2011-09-21 17:00:49
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-09-22 12:30:29
我们也是自己做Marker的，不是整数带！
可能在跑完胶鉴定完后，过了很久才加loading buffer的，切光了！
赞一下(1人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-22 08:49:33
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kuangxia

铜虫 (初入文坛)
wanhscn: 待高手回答！ 2011-09-22 10:02:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-22 08:49:33:
我们也是自己做Marker的，不是整数带！
可能在跑完胶鉴定完后，过了很久才加loading buffer的，切光了！

跑完胶鉴定以后就拿出来加了loading buffer和EDTA啊，而且后来又做的那次结果挺好的，现在还一直在用那个marker，还是很稳定的。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-22 09:11:42
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liukun261

禁虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励新虫发帖！ 2011-10-06 11:54:09
本帖内容被屏蔽
5楼2011-10-06 11:36:31
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kuangxia

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liukun261 at 2011-10-06 11:36:31:
怎样自制marker    请教？？？

就用限制性内切酶酶切确定的质粒就行了。
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6楼2011-10-12 16:11:15
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

这样做成本是不是比买还要高啊？
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在等待中涅槃重生
7楼2011-10-12 17:57:27
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

自制marker！！！打老板PP，或者让老板给币币！
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致良知
8楼2011-10-12 18:18:53
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