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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关毕赤酵母的平板筛选
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 有关毕赤酵母的平板筛选

宿主是GS115，质粒为ppic9k。
本人想用YPD固体培养基涂平板，培养基中含有我的目标酶底物，如果能够在平板上诱导表达目标基因，就能在直接得到阳性克隆了。
现在想求教一下我用50mg/ml的KAN作为抗生素，应该怎么添加甲醇诱导啊？
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1楼 2011-09-20 10:27:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-09-20 11:09:32
lmzxcom1(金币+1): 谢谢，学习了，遗传霉素一般储存液和用量要多少 2011-09-20 12:41:10
毕赤酵母是真核生物本身有一定的卡那霉素抗性，所以筛选时，肯定不能用卡那霉素，要用遗传霉素抗性筛选。平板上甲醇诱导不好操作的，一般摇瓶中进行甲醇诱导。
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2楼2011-09-20 10:34:48
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lmzxcom1(金币+1): 谢谢版主 2011-09-20 12:41:21
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-09-20 17:17:55
可参考下面的文献，原理以及技术都有！
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

corean613
真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-20 11:09:12
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普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
lmzxcom1(金币+3): 那几滴挥发出来的甲醇蒸汽就足够达到诱导效果了么，会不会有点少 2011-09-20 12:42:15
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-09-20 14:15:42
抗生素要用遗传霉素。
平板诱导，可以在平板盖内侧滴上几滴甲醇，密封后，倒置平板培养。
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Thank-you，so-blue.
4楼2011-09-20 11:23:32
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-20 17:18:10
刚找了下，没找到具体滴加的量。
个人认为平板上能长出的菌细胞个数有限，少量甲醇应该就可以达到诱导效果。
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Thank-you，so-blue.
5楼2011-09-20 12:54:46
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by susizheng at 2011-09-20 12:54:46:
刚找了下，没找到具体滴加的量。
个人认为平板上能长出的菌细胞个数有限，少量甲醇应该就可以达到诱导效果。

冒昧的问一句，你或者同事有人这样做过么
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6楼2011-09-20 13:48:28
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
6楼: Originally posted by lmzxcom1 at 2011-09-20 13:48:28:
冒昧的问一句，你或者同事有人这样做过么

没有，只是记得在文献，有这样做过的。
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Thank-you，so-blue.
7楼2011-09-20 13:51:21
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by susizheng at 2011-09-20 13:51:21:
没有，只是记得在文献，有这样做过的。

好，我试试吧
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8楼2011-09-20 13:54:38
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lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by susizheng at 2011-09-20 13:51:21:
没有，只是记得在文献，有这样做过的。

你用过GS115的宿主么，它的G418耐受极限浓度大约多少微克/ml
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9楼2011-09-20 15:17:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
9楼: Originally posted by lmzxcom1 at 2011-09-20 15:17:29:
你用过GS115的宿主么，它的G418耐受极限浓度大约多少微克/ml

看三楼给你的材料，应该看完就没什么问题了。
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Thank-you，so-blue.
10楼2011-09-20 16:05:24
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