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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SSH试验中接头连接不上，着急，请做过的高手帮忙解决一下，万分感激！
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meimeichen

金虫 (正式写手)

[求助] SSH试验中接头连接不上，着急，请做过的高手帮忙解决一下，万分感激！

我是用SMARTER合成的dscDNA，酶切纯化后用接头怎么也连接不上，下面的图是16度连接过夜后，效率检测的结果，1是用GAPDH 3‘引物和接头引物primer 1的产物，正常情况要是接不上的话，应该是扩不出来的吧，我的怎么会出现一条弥散的带呢？很费解，做了好几次都这样，还请大家给分析下，万分着急，3是gapdh目的片段。


[ Last edited by meimeichen on 2011-9-9 at 16:48 ]
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1楼 2011-09-09 16:12:44
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caixin2323

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

meimeichen(金币+8): 2011-10-08 09:14:54
可能是接头序列有问题，请重新合成，自己制作接头；酶切的结果应该没有问题；最好电泳检测看酶切切开了没有。
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5楼2011-09-18 09:30:08
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clare420

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-09 19:39:33
meimeichen(金币+15): 2011-10-08 09:14:05
这个我做过，你在做效率检测之前要先摸索一下条件，我的也有这样的条带，后来提高温度就好了。
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2楼2011-09-09 17:02:24
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

meimeichen(金币+5): 2011-10-08 09:14:23
做个巢扩，加接头的PCR这一类实验由于模板很复杂，一般一轮PCR很难得到单一条带。
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4楼2011-09-10 12:05:43
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