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meimeichen

金虫 (正式写手)

[求助] SSH试验中接头连接不上,着急,请做过的高手帮忙解决一下,万分感激!

我是用SMARTER合成的dscDNA,酶切纯化后用接头怎么也连接不上,下面的图是16度连接过夜后,效率检测的结果,1是用GAPDH 3‘引物和接头引物primer 1的产物,正常情况要是接不上的话,应该是扩不出来的吧,我的怎么会出现一条弥散的带呢?很费解,做了好几次都这样,还请大家给分析下,万分着急,3是gapdh目的片段。


[ Last edited by meimeichen on 2011-9-9 at 16:48 ]
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

meimeichen(金币+5): 2011-10-08 09:14:23
做个巢扩,加接头的PCR这一类实验由于模板很复杂,一般一轮PCR很难得到单一条带。
4楼2011-09-10 12:05:43
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clare420

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-09 19:39:33
meimeichen(金币+15): 2011-10-08 09:14:05
这个我做过,你在做效率检测之前要先摸索一下条件,我的也有这样的条带,后来提高温度就好了。
2楼2011-09-09 17:02:24
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caixin2323

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

meimeichen(金币+8): 2011-10-08 09:14:54
可能是接头序列有问题,请重新合成,自己制作接头;酶切的结果应该没有问题;最好电泳检测看酶切切开了没有。
5楼2011-09-18 09:30:08
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