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pcr总是出现涂抹样条带，空白和隐性对照也是涂抹条带
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各位好： 最近进行玉米转基因检测PCR，但是总是出现涂抹样条带，空白和隐性对照也是涂抹条带。正对照采用质粒进行PCR，但是也会有弥散，图片如下所示，PCR体系为25ul。其中 10×Buffer 2,5ul dNTP ( 10 mM) 0.5 primer mix (10pM) 0.25 taq (2.5U/L) 0.25 DNA 1-3ul（20ng/ul） H2O 补足25ul 预变性 95 ℃ 10 min 95℃ 50 S 52 ℃ 30 s (温度再调整) 72 ℃ 40s 35个循环 72 ℃ 10min 4 ℃ 保存 .条件一直都在调整，引物用primer5设计，给出的建议退火温度为53度，酶 DNTP BUFFER 引物都换新的了，还是弥散。用质粒做了一次梯度，如下图所示，marker 水 CK- CK+样品 中间空一个之后是梯度PCR点样，退火温度从左到又为52-59度。 现在不知道该怎么改变了。试验很急啊，已经耽误了1周时间了。该怎么做啊。 |
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天使托
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T.Shen
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2楼2011-09-08 19:25:03