| 查看: 1221 | 回复: 1 | |||
wzhgaochuan新虫 (小有名气)
|
[求助]
pcr总是出现涂抹样条带，空白和隐性对照也是涂抹条带
|
|
各位好： 最近进行玉米转基因检测PCR，但是总是出现涂抹样条带，空白和隐性对照也是涂抹条带。正对照采用质粒进行PCR，但是也会有弥散，图片如下所示，PCR体系为25ul。其中 10×Buffer 2,5ul dNTP ( 10 mM) 0.5 primer mix (10pM) 0.25 taq (2.5U/L) 0.25 DNA 1-3ul（20ng/ul） H2O 补足25ul 预变性 95 ℃ 10 min 95℃ 50 S 52 ℃ 30 s (温度再调整) 72 ℃ 40s 35个循环 72 ℃ 10min 4 ℃ 保存 .条件一直都在调整，引物用primer5设计，给出的建议退火温度为53度，酶 DNTP BUFFER 引物都换新的了，还是弥散。用质粒做了一次梯度，如下图所示，marker 水 CK- CK+样品 中间空一个之后是梯度PCR点样，退火温度从左到又为52-59度。 现在不知道该怎么改变了。试验很急啊，已经耽误了1周时间了。该怎么做啊。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有140人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SOE pcr目的条带很暗，非特异条带很亮？
已经有10人回复
- 崩溃ing---PCR后无条带问题
已经有16人回复
- PCR时出现了非目的片段的超大片段条带
已经有16人回复
- 空白也PCR出的两条带
已经有19人回复
- PCR 总是呈现涂抹状 求解答！
已经有39人回复
- 连接后转化子PCR出现非特异性的条带
已经有10人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- PCR无任何条带，完全是空白胶
已经有15人回复
- 【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
已经有10人回复
- 【求助/交流】pcr条带问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR阴性对照总有微弱条带！！！
已经有28人回复
- 【求助/交流】样品PCR老是涂抹带是怎么回事
已经有10人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16382.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3648
- 在线: 288.2小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-09-08 19:25:03