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amon7788

新虫 (初入文坛)

[交流] 有人用镍柱纯化130 kD以上的大蛋白的吗? 已有3人参与

有人用镍柱纯化130 kD以上的大蛋白的吗?
为什么我的蛋白不挂柱呢?
试了很多方法都没用
有别的方法纯化吗
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 感谢交流~! 2011-09-07 13:11:38
silicare(BioEPI+1): 谢谢参与 2011-09-08 14:18:51
silicare(BioEPI+1): 谢谢参与 2011-09-08 14:18:53
silicare(BioEPI-1): 系统故障 2011-09-08 14:19:18
有可能tag没有暴露出来吧。
你可以试试取部分加尿素变性后过柱,看能不能挂,能挂的话肯定tag被折叠到内部去了。
把tag换到蛋白的另一端,或者变性纯化后复性。
或者用其他方法如IEC、HIC纯化吧。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
2楼2011-09-07 12:15:50
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lhczj

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
蛋白质纯化的方法很多,有的时候没有必要非得加标签,如果不要标签的话还需要酶切,建议采用其他方法试试,比如例子交换,疏水等都是很常用且有效的方法,相对纯了后再做可能对目标蛋白在什么情况下能够结合更容易判断。希望对你能有作用。
3楼2011-09-07 21:04:16
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lhczj

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
silicare(金币+4, BioEPI+1): 谢谢参与 2011-09-08 14:18:40
还有就是如果蛋白质较大的话容易形成空间位阻,不利于二者的结合,如果你是实验室规模,单纯为了得到些样品,可以采用上样时延长上样时间来解决这个问题,延长二者的结合时间,能够增加结合效果。这也是实验室常用的方法
4楼2011-09-07 21:07:51
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biology-girl

新虫 (正式写手)

大蛋白 嗯
5楼2014-06-16 10:53:01
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