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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[求助] 转基因问题

各位大虾,我想做转基因,可是我转的基因在小鼠中本来就有,我应该如何确定后代中有没有转成功?是原来的,还是我转进去的??求各位大虾帮忙,不胜感激!!
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心,是用来使用的,不能搁浅!
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-07 08:25:32:
其实有没有荧光无所谓,有荧光的话可能更直观点,有没有成功转入直接用PCR就可以了,pc3.1可以的,因为在老鼠基因组内是没有CMV的,CMV和你的目的基因是连在一起的,PCR检测到CMV转入了,就可以判定你外源的目的基 ...

那CMV用pcr检测,使用通用的测序引物检测,还是自己设计的目的基因的引物检测,谢谢
心,是用来使用的,不能搁浅!
8楼2011-09-07 09:27:02
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

XI4ZHL(金币+2): 谢谢你 2011-09-07 08:14:45
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。
2楼2011-09-06 08:13:56
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 世外清风 at 2011-09-06 08:13:56:
启动子什么的特异吗?或看看里面有没有其他一段和基因组内不同的序列进行扩增即可。

我不用启动子,直接用基因序列cds区做可以吗?基因和小鼠的同源性很高,我把质粒上加上荧光蛋白再转可以吗?这样可以检测后代中是否有光蛋白,有的说明转成功,再做这个基因的定量可以吗??大虾,希望达到你的帮助,谢谢!
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3楼2011-09-06 08:37:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

没启动子当然不行了.根本启动不了...你是连到什么载体上,是不是载体上已经有CMV启动子了,你扩一段载体上的序列应该也可以吧,之后做做定量看看有没有过表达是可以的
4楼2011-09-06 14:09:03
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