24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 8332  |  回复: 6

澜森

无虫 (初入文坛)

[交流] LB培养基配方已有5人参与

液态培养基

  根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著)配制每升培养基,应该在950 ml去离子水中加入:

  胰化蛋白胨 10g

  酵母提取物 5g

  NaCl 10g

  摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容至1L.在15psi高压下蒸汽灭菌20min. (1.05kg/cm3)
  LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.

  LB培养基的配方如下:

  胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L

  酵母提取物(Yeast extract) 5g/L

  氯化钠(NaCl) 10g/L

  另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)

  固态培养基

  LB固体培养基1L和液体一样,加15g琼脂粉,一定要在温度降下之前加好抗生素,并且倒好板。

  LB固体培养基倒板

  1.配制:100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉

  2.抗生素的加入:高压灭菌后,将融化的LB固体培养基置与55℃的水浴中,待培养基温度降到55℃时(手可触摸)加入抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀。

  3.倒板:一般10ml倒1个板子。培养基倒入培养皿后,打开盖子,在紫外下照10-15分钟。

  4.保存:用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用。



抗生素终浓度Amp 100ug/ml,Kan 50ug/ml.
来自于生物114,见签名档,囊括了生物综综合类网站(生物门户,生物博客,生物视频,生物软件,生物词典,生物招聘,国内外生物期刊与数据库),生物教研(生物教育,生物考研考博,生物研究所,生物院校,生物论坛),生物学科类(分子生物与遗传学等),生物仪器设备。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

有用的资料 有用 微生物生态学

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

生物114、生物导航、http://www.shengwu114.com/
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x518617

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币-10): 马甲惩罚! 2011-09-02 19:07:18
好东西,留下了。
好像这个网站蛮好的。
2楼2011-09-02 18:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cao534

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
为什么7.4是最适合菌体生长的ph,LB培养基不跳到7.4而使7.0呢?
3楼2011-09-02 18:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WANGQWERT

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
进口的胰蛋白胨和酵母提取物配置后,一般无需调节PH
4楼2011-09-03 18:04:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
10ml倒1个板子?我一般是20-30ml一个板子哦。

那不是很浪费?!
5楼2011-09-04 11:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
6楼2011-09-04 16:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莎莎乐happy

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
培养基倒入培养皿后,不需要在紫外下照吧!倒板子时,在超净台上做无菌操作即可。
7楼2011-09-06 15:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 澜森 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见