24小时热门版块排行榜    

查看: 880  |  回复: 4
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-08-30 15:27:44
guoting329(金币+5): 很好 2011-08-30 16:52:17
1:你的载体上有无筛选标记,比如说LacZ等,如果有的话可以借助筛选标记完成你的克隆;
2:固体板子上长出来,在液体里要不出来原因可能:
   2.1:液体LB一般比固体敏感一些,所以用Kan浓度应该比固体稍微低一些,当然了,你如果用相同浓度也可以,但是如果不长,并不一定是假阳性,有可能是液体中浓度过大导致长不起来,这时候就需要降低液体中的抗生素浓度;
   2.2 :假阳性
   2.3:其实你可以挑取长出来的单克隆划线在相同浓度的抗生素板子上,然后PCR,提取质粒验证。。。当然了你选择菌液PCR也可以的;
3:你连接过程中有问题,当然了从以下几方面改进:
    3.1:载体和基因双酶切是否完全?纯化呢?
    3.2:载体和基因纯化完之后,电泳定量,然后确定连接体系中载体和基因的添加量。。。有可能是你连接体系不太合适。
4:针对目前的情况,就是把板子上的单克隆划线在相同浓度的板子上,然后PCR验证。。。然后提取质粒酶切验证。。。

祝好运。。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-08-30 15:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoting329 的主题更新
信息提示
请填处理意见