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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-08-30 15:27:44
guoting329(金币+5): 很好 2011-08-30 16:52:17

1：你的载体上有无筛选标记，比如说LacZ等，如果有的话可以借助筛选标记完成你的克隆；
2：固体板子上长出来，在液体里要不出来原因可能：
2.1：液体LB一般比固体敏感一些，所以用Kan浓度应该比固体稍微低一些，当然了，你如果用相同浓度也可以，但是如果不长，并不一定是假阳性，有可能是液体中浓度过大导致长不起来，这时候就需要降低液体中的抗生素浓度；
2.2 ：假阳性
2.3：其实你可以挑取长出来的单克隆划线在相同浓度的抗生素板子上，然后PCR，提取质粒验证。。。当然了你选择菌液PCR也可以的；
3：你连接过程中有问题，当然了从以下几方面改进：
3.1：载体和基因双酶切是否完全？纯化呢？
3.2：载体和基因纯化完之后，电泳定量，然后确定连接体系中载体和基因的添加量。。。有可能是你连接体系不太合适。
4：针对目前的情况，就是把板子上的单克隆划线在相同浓度的板子上，然后PCR验证。。。然后提取质粒酶切验证。。。

祝好运。。。。

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

3楼2011-08-30 15:19:12

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