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造血干细胞

铜虫 (初入文坛)

[求助] 转质粒不成功,好几次了,大家给分析一下问题会出在哪里

目前在做质粒构建,问题是,载体酶切,片段酶切之后连接转化涂板总是什么都不长,试过电转,DH4a转,都没有成功,我之前没怎么做过,实在不清楚问题出在哪里,求高手指教
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1楼 2011-08-23 17:03:33
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-24 10:55:04
引用回帖:
7楼: Originally posted by 造血干细胞 at 2011-08-24 10:06:46:
1.酶切过纯化后我都是跑电泳看过条带的,
2.我还是觉得是我的链接体系有问题,那么请问通用比例是多少呢

没有所谓的通用比例，具体载体和基因添加多少，我们这边有个公式:1/10<载体质量/大小/基因质量/基因大小<1/3

所以连接体系中载体和基因的添加量不光是根据纯化电泳后的亮度而定，还要根据载体和基因的大小而定。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
8楼2011-08-24 10:29:55
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 是需要考虑，鼓励交流 2011-08-23 19:11:44
原因可能有很多，感受态细胞是否不行？连接是否成功？
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2楼2011-08-23 18:03:04
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叶心飞翔

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 是要认真的 2011-08-23 19:11:55
质粒有没有特殊性，有没有做阳性对照？还是仔细的做好每步工作
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-08-23 18:06:27
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

实在不行的话，楼主能不能考虑让师兄姐妹代做一下看看！
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jiayoubashaonian
4楼2011-08-23 20:42:49
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