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xintutiao金虫 (小有名气)
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请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来 已有15人参与
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| 请教各位前辈 PCR的体系是师姐给的，她说一直都用这个，让我做的时候，我总也P不出来 模板是用小枪尖挑的菌落，然后在体系中蘸几下。 不知道为什么 我总是P不出来，P出来的时候很少很少， 我感觉不出来每次做的有什么差异，但是为什么就是P不出来呢？ 谢谢大家了 |
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wuyuan1992
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我的第一感觉有两个原因 一个是菌体量，菌体量太多或者太少都可能导致扩增不出。我之前做16SDNA菌落PCR种属鉴定的时候就用牙签轻轻蘸一下就能P出了，如果菌体量太多的话可能导致扩增不出，道理和http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4765321相似 第二个可能是预变性时间不够，正如楼上所说。因为革兰氏阴性和阳性菌的细胞壁结构不一样，革兰氏阳性细胞壁厚且肽聚糖层交联度高，应该更难破裂。但是如果你师姐之前用的菌和你用的菌是一样的，就可以排除这种可能了。 |
25楼2012-08-12 23:53:08
gwbk
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2楼2011-08-23 23:40:57
redlizi
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4楼2011-08-24 08:45:45