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camen

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教脂肪酶活性测定

大家好,问个酶学的基本问题。
我利用分光光度计法pNPB测脂肪酶活性,测405nm处连续光吸收,根据初速度得到斜率,请问如何根据斜率来计算酶活结果,非常感谢!
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看天

木虫 (知名作家)

你是在标准的1cm光径的比色皿中吗?
什么物质的吸光度?如果是NADH的查询摩尔吸光系数
戒嗔怒以养肝气,省言语以养神气,多读书以养质气,顺时令以养元气,不拘节以养大气,观天变以养灵气,莫强求规于运气。
3楼2011-08-23 08:32:13
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camen

新虫 (初入文坛)

希望有知道的朋友帮帮忙,谢谢!
2楼2011-08-22 22:59:53
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imfly77

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 鼓励交流,欢迎常来 2011-08-23 13:27:36
1分子的pNPB水解生成1分子的pNP(对硝基苯酚),pNP在405 nm下有特异性吸收,对应有个摩尔消光系数ε(比如18.8 cm2/μmol,不同的文献值会有略微差别,也可以你自己用pNP标准品标定。一般来说选一个值,然后注明参考文献就行了),按下面这个式子计算酶活:U=(斜率×稀释倍数)/(光程×摩尔消光系数)
其中:
斜率就是酶标仪读书,注意通常酶标仪读数单位是10^-3 min-1;
光程就是溶液最低处的厚度,需要量一下;
稀释倍数是指体系体积与酶的加入量的比,比如200 ul体系+5 ul酶,稀释倍数就是41.
最后注意检查一下所有物理量的量纲要统一。
4楼2011-08-23 08:39:09
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muchong5577

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-23 13:27:48
脂肪酶是在油水界面催化反应,机理不同于其它单一相的酶类,其反应不符合传统的酶促动力学方程(有文献报道过),根据初速度计算酶活不科学。建议楼主采用pNPB加标准曲线法。
5楼2011-08-23 08:49:16
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