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马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[求助] 关于MCF-7细胞培养的问题

请问各位,我最近在培养MCF-7,可是这次传代后细胞3天了贴壁很少,细胞生长状况较差,培养液颜色仍然很红,漂浮细胞较多,并未发现染菌情况,怀疑是离心后放置时间太长。请问离心后细胞能放置在离心管里一段时间吗,这样会影响细胞活性吗~~
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

马龙sweeting(金币+1): 谢谢啊~~我的细胞是沉淀完没有进行悬浮也没有将培养液吸出,这样也没事儿吗? 2011-08-21 09:03:38
按你所说的,癌细胞沉淀悬浮于培养基中,常温情况下放两三个小时是肯定不会死亡的。建议检查收集细胞前的生长状态。若良好的话,检查酶消化时是否过度消化,吹打是否用力过大,还有就是离心转速控制在一千转以内。这个细胞我养过很久,只要控制好这几个步骤,不会出现你说的这个问题的。再就是这个细胞比较难消化,难以控制消化时间和程度,估计问题就出在这一步了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2011-08-20 22:52:03
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

马龙sweeting(金币+1): 我市将离心后的沉淀连着培养液一起放置的,放了十几分钟,发现细胞活力下降,几乎都死了,是因为这个原因吗 2011-08-20 21:03:58
离心后若想放置,需PBS或培养基悬浮,置于培养箱或冰上,可放置一天以内。最好PBS或培养基添加5%血清。如果将离心后的细胞沉淀放置,细胞数小时内就会活力下降,甚至死亡。
2楼2011-08-20 20:15:22
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l-c-l

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
adslye(金币+5): 感谢应助,三篇一起奖励~祝顺利! 2011-08-21 09:36:09
这个细胞沉淀要吹打成细胞悬液,于培养液中才可以生存。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2011-08-21 09:13:34
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guifang

铁杆木虫 (小有名气)

一般来说,MCF-7细胞被公认为不是很好养的癌细胞之一,所以你这种情况比较正常,像中科院细胞库的话,用的血清是从德国进口的,所以这种细胞对血清的要求比较高,建议你换用进口胎牛血清试试。
5楼2011-11-02 11:21:31
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