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Silencess

金虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 0 (幼儿园)
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散金: 5
帖子: 183
在线: 58.5小时
虫号: 943511
注册: 2010-01-16
专业: 发育生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 热心哦 2011-08-25 18:34:06
wanhscn(MolEPI+1): 谦虚！热心！专业！经决定，给与一个专家指数！ 2011-10-22 10:32:40

引用回帖:

9楼: Originally posted by hnndpt at 2011-08-24 21:36:56:
我做反向PCR的步骤：
1.提取基因组，HaeIII酶切过夜
2.酚-氯仿抽提酶切产物，沉淀DNA,用20微升水溶解
3.取4微升溶解过的DNA, 加入连接酶，用400微升体系连接
4.酚-氯仿抽提连接产物，无水乙醇沉淀DNA, 用 ...

提取基因组之后，测浓度，酶切过夜。
切胶回收，试剂盒纯化，测浓度。
100ul体系连接，一般好像是加入200ng左右的酶切片段。16度环化过夜。
我在环化之后就直接做PCR了。
环化的时候家的DNA的量要少。
还有就是酶切的基因组纯度要高。多设计几对引物吧。

弱弱的问一句，你用反向pcr扩增什么呢，这个确实不好做啊。