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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 液质提取回收率的问题
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990597895

金虫 (初入文坛)

[求助] 液质提取回收率的问题

提取方法是乙腈沉淀蛋白，配制低、中、高三个浓度的样品溶液各5份，峰面积为A1，同法配制经沉淀后取上清液加样的低、中、高三个浓度的样品溶液5份，峰面积为A2，提取回收率=(A1/A2)*100%，结果是每一浓度计算的提取回收率5个值中都出现1个左右的异常值，即比其他4个值过高或过低，问题1：要不要将这个值去掉呢？另外同一浓度5个样品峰面积（A1、A2）呈下降趋势，问题2：同法操作5个样品峰面积应该大体一致，但为什么会呈下降趋势呢，内标峰面积值也是如此？问题3：低、中、高三个浓度样品，只有中、高浓度的提取回收率达到了基本要求，低浓度的才30%左右，这是什么原因造成的呢？内标在低、中、高三个浓度中的提取回收率也跟样品的提取回收率情况相似，是不是操作出了问题?请大家帮我分析分析
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1楼 2011-08-15 10:40:15
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中药2000

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主
欢迎大家应助。
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2楼2011-08-15 11:06:59
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

因为我没有操作过乙腈沉淀蛋白这个实验，因此楼主能不能将实验过程描述得尽可能详细一点呢？
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心似白云常自在，意如流水任东西。
3楼2011-08-15 12:25:41
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990597895

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leecius at 2011-08-15 12:25:41:
因为我没有操作过乙腈沉淀蛋白这个实验，因此楼主能不能将实验过程描述得尽可能详细一点呢？

提取方法：精密量取抗凝全血样品400 μl置2.0 ml EP 管中，加入内标溶液100 μl和沉淀剂乙腈400 μl，涡漩2 min，12000 r•min-1离心10 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液按色谱和质谱条件进样。
提取回收率：配制低、中、高三种浓度（0.5、20、50 ng•ml-1）的质量控制（QC）样品,每浓度5样本,取空白全血400 μl，加入相应标准溶液100 μl，内标溶液100 μl，加入沉淀剂乙腈400 μl，涡漩2 min，12000 r•min-1离心10 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液按色谱和质谱条件进样，记录样品的峰面积A1；取空白全血400 μl，加入沉淀剂乙腈400 μl，涡漩2 min，12000 r•min-1离心10 min，取上清液加入相应标准溶液100 μl，内标溶液100 μl，混匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，续滤液按色谱和质谱条件进样，得色谱峰面积A2；以每一浓度两种处理方法所测得峰面积比值来计算提取回收率，f=（A1/ A2）×100%
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4楼2011-08-15 13:28:10
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caicaiseven

银虫 (初入文坛)
★
karl2100(金币+1): 3Q 2011-08-16 03:34:29
lz基本操作没有问题的话，应该考虑一下液质方法的问题或者样品稳定性吧~ 先不说提取回收率是否合格，如果峰面积一边做一边减小的话，肯定要先优化方法啦~
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5楼2011-08-15 14:35:24
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