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本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

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dzwd

金虫 (小有名气)

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[求助] 长片段DNA如何连接载体

4900bp长度 DNA 片段，我用的是TAKARA,PMD19-T载体进行连接，连接数小时，但是在筛选蓝白菌斑的时候，菌落白斑过少，不知道是什么原因，并且菌落PCR后无条带，总是连接不上。。希望能得到解答，谢谢！！

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1楼 2011-08-12 10:45:43

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dzwd

金虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-12 10:48:20:
楼主的DNA片段浓度太小吧！

不好意思，那您认为多大浓度为好呢，我不是很明白，您能在说清楚一些么

7楼2011-08-12 10:55:05

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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

dzwd(金币+1): 2011-08-13 22:48:56

楼主的DNA片段浓度太小吧！

jiayoubashaonian

2楼2011-08-12 10:48:20

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blackrose8089

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西瓜(金币+4): Good！7K多，不错嘛！ 2011-08-12 18:17:36

我们曾今做过7.3k的连接，将目的片段浓度调节的特别大，最后加了100ul感受态，板子长的时间长些！

赞一下(2人)

jiayoubashaonian

3楼2011-08-12 10:50:20

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dzwd

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引用回帖:

3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-08-12 10:50:20:
我们曾今做过7.3k的连接，将目的片段浓度调节的特别大，最后加了100ul感受态，板子长的时间长些！

你们在连接载体的时候，用了多少ul的目的片段呢

4楼2011-08-12 10:51:54

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