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空蓝Y劫

新虫 (小有名气)

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[求助] westen blot 染色

最近做western blot 实验结果总是不理想，不出条带。开始时以为是转膜的问题，但染色后的膜在放置一晚上后，染色液蒸发掉了，这个时候在膜上竟然出现条带了！！，

这是怎么个情况呢？？

染色液不知道是什么东西，见上面有 amresco 字样，

膜的话上有Hybond字样，使用前100%甲醇浸泡10s.

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1楼2011-08-12 08:39:28

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w2boluo

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 感谢参与 2011-08-12 22:56:59
空蓝Y劫(金币+1): 额，三明治没写全，从下到上，依次是：黑板，海绵，滤纸，胶，膜，滤纸，海绵，白板。这个顺序没问题吧？黑板靠黑面放 2011-08-15 08:51:30

当然有这种情况。但一般来说200ma一小时对湿法也不算太大。不知道你的转膜装置是多大，我以前一直350ma1小时的。pvdf膜极性较强能吸附的蛋白多，很难全部跑到膜外。你的预染marker在哪里？那个是最直接的证据，转不上应该还在胶里，转过头了既不在胶上也不在膜上。还有你上面写的那个三明治，怎么没有看见胶。胶和膜贴合是否紧密没有气泡？