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friya0910新虫 (正式写手)
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连接体系的确定
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这是我酶切载体和目的基因以后切胶回收的电泳图，左边为载体，右边为目的片段，上样量均为2微升，有没有高手帮我看看我的连接体系中载体和目的片段怎么定量啊？我用的是宝生物的T4连接酶，25微升的体系加1微升的酶和2.5微升的buffer。还有一个问题是连接之后的连接液可以直接做转化么？我看说明书上说还要加醋酸钠，无水乙醇沉淀等！ |
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1): 2011-08-12 09:09:13
西瓜(金币+4): 几条带的是Maker吧 2011-08-12 17:55:13
friya0910(金币+1): 2011-08-12 09:09:13
西瓜(金币+4): 几条带的是Maker吧 2011-08-12 17:55:13
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楼主， 你的图片说明太模糊，别人没法给你出主意。 首先， 你的左边和右边， 怎么区分的问题。 你有四条泳道都有带， 并且， 只是坐起第二个泳道是单带。 其他都是几条带。 看完之后， 我所能够给你提供的仅仅只有下面几点： 1，做连接之前， 必须保证， 回收之后电泳检验时，是单一条带，并且不要拖带。 ,2，连接产物的比例。 这个确实需要按照DNA的量来计算， 不能按照体积比。 3，说明书说要加入乙酸钠和无水乙醇， 那是为了沉淀你的连接产物，除去盐离子和提高DNA的浓度。 这样，你就能以尽量小的体积，尽量低的盐离子浓度，尽量高的浓度来进行转化，从而最大程度的提高转化效率和成功率。 祝你好运 |
5楼2011-08-12 00:49:18
friya0910
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2楼2011-08-11 20:36:48
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3楼2011-08-11 20:57:06
friya0910
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4楼2011-08-11 21:34:34