| 查看: 3469 | 回复: 19 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
friya0910新虫 (正式写手)
|
[求助]
连接体系的确定
|
||
这是我酶切载体和目的基因以后切胶回收的电泳图，左边为载体，右边为目的片段，上样量均为2微升，有没有高手帮我看看我的连接体系中载体和目的片段怎么定量啊？我用的是宝生物的T4连接酶，25微升的体系加1微升的酶和2.5微升的buffer。还有一个问题是连接之后的连接液可以直接做转化么？我看说明书上说还要加醋酸钠，无水乙醇沉淀等！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有97人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- puc19克隆反应体系
已经有6人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 分子克隆连接问题！
已经有12人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 载体连接
已经有7人回复
- 【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】请问大家：将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊？
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】连接转化长菌有质粒，但是没有目的片段，怎么回事？？
已经有20人回复
未知树
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 1931.7
- 散金: 22
- 红花: 14
- 帖子: 1271
- 在线: 217.5小时
- 虫号: 935327
- 注册: 2009-12-30
- 性别: MM
- 专业: 病毒学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
friya0910(金币+1): 2011-08-12 09:09:13
西瓜(金币+4): 几条带的是Maker吧 2011-08-12 17:55:13
friya0910(金币+1): 2011-08-12 09:09:13
西瓜(金币+4): 几条带的是Maker吧 2011-08-12 17:55:13
|
楼主， 你的图片说明太模糊，别人没法给你出主意。 首先， 你的左边和右边， 怎么区分的问题。 你有四条泳道都有带， 并且， 只是坐起第二个泳道是单带。 其他都是几条带。 看完之后， 我所能够给你提供的仅仅只有下面几点： 1，做连接之前， 必须保证， 回收之后电泳检验时，是单一条带，并且不要拖带。 ,2，连接产物的比例。 这个确实需要按照DNA的量来计算， 不能按照体积比。 3，说明书说要加入乙酸钠和无水乙醇， 那是为了沉淀你的连接产物，除去盐离子和提高DNA的浓度。 这样，你就能以尽量小的体积，尽量低的盐离子浓度，尽量高的浓度来进行转化，从而最大程度的提高转化效率和成功率。 祝你好运 |
5楼2011-08-12 00:49:18
friya0910
新虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在线: 77.4小时
- 虫号: 1073675
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 作物分子育种
2楼2011-08-11 20:36:48
blackrose8089
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 16
- 应助: 100 (初中生)
- 贵宾: 0.11
- 金币: 10643.1
- 散金: 155
- 红花: 30
- 沙发: 6
- 帖子: 3706
- 在线: 792小时
- 虫号: 614948
- 注册: 2008-09-28
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2011-08-11 20:57:06
friya0910
新虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 19.4
- 散金: 360
- 帖子: 401
- 在线: 77.4小时
- 虫号: 1073675
- 注册: 2010-08-12
- 专业: 作物分子育种
4楼2011-08-11 21:34:34
