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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-08-10 12:13:44
西瓜(金币+5): 学习了!很有经验呢! 2011-08-10 17:56:19
wanghd2826(金币+15): 多谢指点,以后有不懂的地方再请教前辈! 2011-08-11 23:16:14
西瓜: 漏了EPI,现在补上,抱歉哦! 2011-08-12 00:15:54
西瓜(MolEPI+1): 2011-08-12 09:06:50
引用回帖:
5楼: Originally posted by wanghd2826 at 2011-08-10 09:55:06:
请问是不是简并引物的退火温度越高越好呢,例如在70度左右,还有就是我用PP5和Oligo6检测得到的退火温度不一样啊 差别还不小,应该用哪个软较好呢?

既然是简并引物,目的引物的序列是不确定的,你用软件检测是没有办法计算得到简并引物的TM值的,推荐使用Touch-down PCR程序,引物之间的TM差别大一点没有关系的,我们以前曾经计算过,利用简并引物扩增得到目的序列,测序以后发现两条引物之间的TM值差别达到15-20度,所以不要太纠结于简并引物的TM,只要注意引物的GC值不要太高和太低就可以了。
祝顺利!
7楼2011-08-10 10:08:12
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