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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自设简并引物几对，请高手帮检查下~~~
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

[求助] 自设简并引物几对，请高手帮检查下~~~

刚开始学习简并引物的设计，看了几篇经典的帖子，受益匪浅，按照步骤尝试设计了几对，但是对于简并引物的检测还不是很有信心，比如退火温度、错配率等等如何协调到最优，希望各路虫友帮忙看下这几对合适不。
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1楼2011-08-08 22:54:15
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-08-10 10:08:12:
既然是简并引物，目的引物的序列是不确定的，你用软件检测是没有办法计算得到简并引物的TM值的，推荐使用Touch-down PCR程序，引物之间的TM差别大一点没有关系的，我们以前曾经计算过，利用简并引物扩增得到目的 ...

多谢提供宝贵建议！ 我还想问下，简并引物一般简并度在多少以内比较合适呢，我看到有的文献（英文）简并引物简并度高的可怕。。另外，看到有帖子发到用CODEHOP方法设计简并引物，自己也尝试了几对，用的是在线CODEHOP设计的，不知道这种方法设计出的引物效果如何呢？
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10楼2011-08-11 23:23:36
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励 2011-08-10 12:13:17
为什么简并点都设计在3‘末端，主要从3’末端开始延伸，这样容易错配，还有为什么都是A结尾啊，容易错配，简并数未免有点多
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2楼2011-08-09 10:02:13
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第五平原

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎讨论 2011-08-10 12:13:31
2楼说的对，3’的碱基以A结尾很容易引发错配，最好是能以T结尾，另外上下游引物之间CG含量和退火温度差异不要太大。
赞一下(1人) 回复此楼
勤勉
3楼2011-08-09 12:33:51
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by love_st at 2011-08-09 10:02:13:
为什么简并点都设计在3‘末端，主要从3’末端开始延伸，这样容易错配，还有为什么都是A结尾啊，容易错配，简并数未免有点多

多谢帮忙啊~
不过我看到许多文献中的3‘端也是简并的啊，这里确实有点不理解。我该怎么修改呢？
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4楼2011-08-10 09:53:09
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