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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于SDS-PAGE与双向电泳的请教
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)

[求助] 关于SDS-PAGE与双向电泳的请教

大家好，我是做双向的，师姐说 先说下SDS-PAGE，看有没有结果，现在做了很长时间的SDS-PAGE，但是效果都不大好，主要问题就是下面的图这样，两个图右二的样品孔里是marker，但是都没有跑出来，而且这些样品孔里好像都相互串了，但是带都没有跑出来，（跑的时候，看不到溴酚蓝的线，好像是晕染的好大一块，不是线）我的样品上样前在分光光度计测了，上样20μl（10μg),5×buffer混合的，加marker的时候，一加进去，加的孔的旁边就染上了，跑出来后，感觉好像每个孔里都有蛋白，但是我都是隔一个孔加个样的，怎么会跑出来是这个样子呢。

我主要是要做双向的，现在浪费了很多时间在SDS-PAGE上了，但是效果还不好！，那我能不能直接做双向呢，SDS-PAGE做的不好，会不会影响我后面做双向呢，所以想问问大家！
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1楼 2011-08-04 16:16:33
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-08-04 17:21:59
菠萝蜜123(金币+9): 2011-08-06 13:07:47
不清楚你的电泳为什么会这样，你可以找个电泳做得好的同学跟他学习一下，看看自己哪里出问题了。
双向电泳其实就是做两次不同电流方向的电泳，如果第一向的PAGE没有做好，肯定会影响最后的分离效果！
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2楼2011-08-04 16:36:52
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菠萝蜜123

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-08-04 16:36:52:
不清楚你的电泳为什么会这样，你可以找个电泳做得好的同学跟他学习一下，看看自己哪里出问题了。
双向电泳其实就是做两次不同电流方向的电泳，如果第一向的PAGE没有做好，肯定会影响最后的分离效果！

这样啊    唉  那我再摸索摸索吧
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3楼2011-08-04 16:46:32
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3205001995

新虫 (初入文坛)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-10-02 14:16:17
胶的配置有没有问题啊，还有样品加了SDS 后有没有煮一下，使蛋白变性啊
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4楼2011-10-01 19:00:44
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
wanhscn(金币+3): 鼓励应助！ 2011-10-02 14:16:24
胶多凝一会儿，可能是凝的时间短。另外检查一下电极缓冲液有没有问题。跑胶的时候电流是不是过小。不知楼主用的是什么品牌的电泳槽？我有次用伯乐的电泳槽没加好内槽的缓冲液漏出去了，电泳自己停了，样品都扩散了。
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5楼2011-10-02 09:47:02
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hellolin

金虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): 有可能哦 2011-10-04 00:25:21
可能是你缓冲液的问题，蛋白都没跑动，说明胶上都没通电
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scienceguy
6楼2011-10-03 11:27:51
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小渔爱折腾

新虫 (初入文坛)
我也出现过这种情况，因为上样量太大了。你测下蛋白浓度，做个梯度上样试试。
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7楼2012-10-19 11:18:27
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