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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE水封压线不平!
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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE水封压线不平!

做了SDS-PAGE胶几次了，老是水封的时候分离胶压得不平整，坑坑洼洼的。。。加水的时候从左上角加得很慢很轻的，不知道为什么会这样

再问个问题，水和分离胶应该会互溶的吧。。。。用水封不就把最上面的分离胶稀释了吗？？？？？

[ Last edited by btx362237729 on 2011-8-2 at 12:23 ]
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人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2011-08-02 12:22:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

btx362237729

金虫 (正式写手)
感谢大家的回答，今天用洗衣粉 洗洁精+乙醇擦了玻璃板。。。。。。然后再制胶终于水封压平了。。。非常平的一直线实验果然还是要多练啊
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人生最黑暗的时光终于过去了
22楼2011-08-03 14:32:23
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普通回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-08-02 18:17:53
不平的原因可能是TEMED加的太多，还没有压好胶就凝了，建议少加点TEMED，操作尽量迅速。水对分离胶影响不大，直接加上就行，只要没有气泡就好
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山水凤凰
2楼2011-08-02 14:17:07
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liukgg at 2011-08-02 14:17:07:
不平的原因可能是TEMED加的太多，还没有压好胶就凝了，建议少加点TEMED，操作尽量迅速。水对分离胶影响不大，直接加上就行，只要没有气泡就好

10%的胶加4ul TMED不多吧。。。。。。但我就是不平啊。。。。。。
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人生最黑暗的时光终于过去了
3楼2011-08-02 14:39:05
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看不懂牛津

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-08-02 18:18:17
我们实验室10%的胶，15ml体系加10ulTEMED，我还没出现过水封不平的情况~
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4楼2011-08-02 18:15:05
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lijunhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-08-02 12:22:34:
做了SDS-PAGE胶几次了，老是水封的时候分离胶压得不平整，坑坑洼洼的。。。加水的时候从左上角加得很慢很轻的，不知道为什么会这样

再问个问题，水和分离胶应该会互溶的吧。。。。用水封不就把最 ...

做完下层胶的时候迅速加上1ml的无水乙醇，压的很平，试试，我们就是用无水乙醇压的
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5楼2011-08-02 18:19:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
1949stone(金币+1): 有道理 不过总感觉怪怪的 2011-08-02 18:38:41
不影响跑胶效果就行了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-08-02 18:21:27
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 看不懂牛津 at 2011-08-02 18:15:05:
我们实验室10%的胶，15ml体系加10ulTEMED，我还没出现过水封不平的情况~

很牛啊 从来没出现过。。。
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人生最黑暗的时光终于过去了
7楼2011-08-02 18:56:54
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
btx362237729(金币+3): 估计是玻璃的问题。怎么也洗不干净 洗衣服 洗洁精都试过 还是成水膜 2011-08-02 19:45:16
西瓜(金币+3): Good！ 2011-08-03 22:25:39
引用回帖:
1楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-08-02 12:22:34:
做了SDS-PAGE胶几次了，老是水封的时候分离胶压得不平整，坑坑洼洼的。。。加水的时候从左上角加得很慢很轻的，不知道为什么会这样

再问个问题，水和分离胶应该会互溶的吧。。。。用水封不就把最 ...

你的玻璃板洗干净了吗？要洗到蒸馏水落在上面即不聚成水滴，也不成股留下，应该成水膜。你用的什么仪器，那里的玻璃板。你配置的试剂是用的ddH2O吗？还有你可以尝试一下把所有试剂除了TEMED过膜，这样会好很多。
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
8楼2011-08-02 19:22:51
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 疯狂修行者 at 2011-08-02 19:22:51:
你的玻璃板洗干净了吗？要洗到蒸馏水落在上面即不聚成水滴，也不成股留下，应该成水膜。你用的什么仪器，那里的玻璃板。你配置的试剂是用的ddH2O吗？还有你可以尝试一下把所有试剂除了TEMED过膜，这样会好很多。

肯定是ddH2O的。。。。。估计是玻璃的问题
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人生最黑暗的时光终于过去了
9楼2011-08-02 19:46:26
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-08-02 19:46:26:
肯定是ddH2O的。。。。。估计是玻璃的问题

你的仪器是哪个公司的？你用什么东西洗得，还有，你洗完用蒸馏水和双蒸水冲吗？
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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！
10楼2011-08-02 19:48:53
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