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yuqiuyamei新虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】请问BSA标准蛋白溶液用什么定容不容易变性？
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| 我最近配制了BSA溶液，含量是5mg/ml，我是用超纯水定容的。可是用BCA实际盒中的标准液测BSA含量时，测的的浓度为1.14mg/ml左右。我的标准曲线浓度为20ug/ml、40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml。BSA溶液我是按照原始浓度默认为5mg/ml进行稀释的，稀释到100ug/ml、200ug/ml。我怀疑可能是超纯水定容BSA时有问题。请问有什么办法能尽可能配制出5mg/ml的BSA标准蛋白溶液？我是在做BCA实验时需要用它来做标准曲线的。 |
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zhongyun8668
铜虫 (初入文坛)
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【答案】应助回帖
yuqiuyamei(金币+1, 博学EPI+1): 非常感谢 2011-08-03 12:58:51
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呃...这个你为何要自己配，单买一支标准的BSA溶液也花不了多少钱。另外，用BCA法来测定蛋白质浓度虽然是目前惯用的一个方法，但其实这个方法很不精确，目前之所以流行，只是因其操作简单，花费便宜，用于初步的蛋白质定量还是非常实用。 同时，你说的这个情况是非常正常的，而且最终测出来是1.14mg/ml也是正确的，因为你从5mg/ml稀释到100和200ug/ml，这之间稀释了50倍和25倍，最终的结果有些出入是正常的，只要差的不是太多（不在一个数量级了）。这个稀释你要用同一把移液枪，而且要用倍比稀释，这样可以保证误差减小。 另外BSA溶液的配制一般是用缓冲液如PBS来配制。BSA稳定性比较好，置于4度冰箱中用个一两月应该没什么问题。 |
2楼2011-08-02 16:09:46