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ZOEY21

金虫 (小有名气)

[交流] 标本提取DNA 已有1人参与

问个低级问题
一直疑惑 标本中提取的DNA是完整的DNA吗? 如果标本可以提取,那为什么还要强调要新鲜的材料?枯落物也能提出完整DNA来吗?酒精浸泡的标本,没有经过其他任何处理,可以提取DNA吗?还有啊 做死者身份鉴定时 尸体的怎么可能保证新鲜呢?
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ybs007

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
标本中是否能提出完整的DNA我不确定。根据你问的问题应该是做多态性研究的吧。我做过物证鉴定方面,从尸体,毛发,体液中都提取过DNA,这些DNA都是断裂的,由于这方面需要扩增的片段都很小,而且扩增的位点都是比较保守的,所以不需要完整的基因组。 我有个师哥以前从甲醛浸泡的蛙中提取过DNA扩增的片段在500左右,楼主可以参考。

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平生我自知
2楼2011-07-25 21:55:54
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
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Originally posted by ybs007 at 2011-07-25 21:55:54:
标本中是否能提出完整的DNA我不确定。根据你问的问题应该是做多态性研究的吧。我做过物证鉴定方面,从尸体,毛发,体液中都提取过DNA,这些DNA都是断裂的,由于这方面需要扩增的片段都很小,而且扩增的位点都是比 ...

谢谢 那标本需要特殊的保存方法吗?只甲醛浸泡就好吗?这里用无水乙醇浸泡的标本提取DNA,在4度放着,降解的厉害啊,惨不忍睹。。。
3楼2011-07-25 22:10:41
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ybs007

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by ZOEY21 at 2011-07-25 22:10:41:
谢谢 那标本需要特殊的保存方法吗?只甲醛浸泡就好吗?这里用无水乙醇浸泡的标本提取DNA,在4度放着,降解的厉害啊,惨不忍睹。。。

我们是用5%的福尔马林室温下保存的蛙标本。而福尔马林中保存的标本DNA是更加难以提取的,主要是因为福尔马林回使蛋白与DNA,DNA与DNA之间发生交联,想必用无水乙醇也会发生类似的情况。所以不管用什么来保存,提取DNA时都要尽量的除去这些保存试剂。而且非常重要的一点,从标本中提取的DNA要尽快的进行扩增。而且即使模板质量低也可以通过增加循环数和降低退火温度来优化,不一定非要追求高质量的模板,够用就好。要是非要保存的话,建议-20甚至-80。楼主把DNA放在4°,只能使DNA降解的速度降低一些,在溶液状态下,即使排除外界因素和酶的影响,水自身也会使DNA发生降解的。
一点经验希望有所帮助

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

平生我自知
4楼2011-07-25 23:12:33
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ZOEY21

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by ybs007 at 2011-07-25 23:12:33:
我们是用5%的福尔马林室温下保存的蛙标本。而福尔马林中保存的标本DNA是更加难以提取的,主要是因为福尔马林回使蛋白与DNA,DNA与DNA之间发生交联,想必用无水乙醇也会发生类似的情况。所以不管用什么来保存, ...

谢谢 谢谢 经您的提示 我又查了查 现在头脑清晰多了
5楼2011-07-30 20:04:23
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