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Illfxy

铜虫 (小有名气)

[求助] 动物细胞蛋白提取含量低

这两天提了两次蛋白但是含量都很低, 师兄过年那段时间提的有最高的有80ug/ml,可是这两天我用了同样的药品和方法 提出来只有20多,细胞密度挺高的不知为何。会不会与离心温度有关 ,我们实验室用冷冻离心机的人少,那台机子长期没人修,我也是才去,没办法就用了常温 。
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探索人类未来的其中一人
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Illfxy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-26 07:09:49:
你最好确定一下是否加了蛋白酶抑制剂。如果没加,那蛋白浓度肯定高不了;如果加了,是什么时候加的,蛋白酶抑制剂最好是现用现加,而且他的有效时间一般在1-2个小时左右。最后一步室温离心问题不大。蛋白不是1400 ...

恩,我会问问师兄的。蛋白离心我用的12000 10min这个影响应该不大吧
探索人类未来的其中一人
7楼2011-07-26 10:29:04
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

Illfxy(金币+2): 谢谢回复,你这一说,我觉得裂解液应该重新配一次来试试,还有那个离心温度会不会有很大影响 2011-07-25 11:51:49
你的裂解液中加了蛋白酶抑制剂了不?是不是浓度不够啊。还有提蛋白跟温度有很大关系,尽量在冰上操作,可以最大限度保证蛋白不被降解
2楼2011-07-25 09:31:54
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Illfxy

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 子曰包子好吃 at 2011-07-25 09:31:54:
你的裂解液中加了蛋白酶抑制剂了不?是不是浓度不够啊。还有提蛋白跟温度有很大关系,尽量在冰上操作,可以最大限度保证蛋白不被降解

裂解液是师兄之前4月配的,我也不清楚里面加了蛋白酶抑制剂了没,他说效果还好,就留着用了。我整个过程都尽量在冰上操作的,没有冷冻离心机,最后一步我用的是常温离心10min。室温很高开空调吹了两个小时还有27度,会不会是离心温度太高了?
探索人类未来的其中一人
3楼2011-07-25 11:45:15
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-07-26 10:34:09
你最好确定一下是否加了蛋白酶抑制剂。如果没加,那蛋白浓度肯定高不了;如果加了,是什么时候加的,蛋白酶抑制剂最好是现用现加,而且他的有效时间一般在1-2个小时左右。最后一步室温离心问题不大。蛋白不是14000,20min吗?
4楼2011-07-26 07:09:49
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