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Illfxy

铜虫 (小有名气)

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[求助] 动物细胞蛋白提取含量低

这两天提了两次蛋白但是含量都很低，师兄过年那段时间提的有最高的有80ug/ml，可是这两天我用了同样的药品和方法提出来只有20多，细胞密度挺高的不知为何。会不会与离心温度有关，我们实验室用冷冻离心机的人少，那台机子长期没人修，我也是才去，没办法就用了常温。

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1楼 2011-07-24 19:56:38

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terry130

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
Illfxy(金币+3): 谢谢回复，谢谢你给出的方法，我会去试试的，buffer可能有问题，最近几天几个学弟提的量也很低 2011-07-26 10:22:11
lstt09nk(金币+5): 感谢交流 2011-07-26 10:34:29
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-07-26 10:34:43

离心温度和转速对浓度的影响并不大，在这种实验中蛋白酶的杀伤作用并没有你想象中那么大，只在长期保存时才需要注意蛋白酶的抑制问题。

你师兄80ug/ml的提取浓度对于哺乳动物细胞而言是相当低的了，正常的话要1ug/ul左右，所以他的buffer本身可能就有问题，用这样的buffer你得到更低的效果也就可以理解了。建议你上网重新找一个标准的buffer配方，推荐你用RIPAbuffer，懒得配的话可以直接去santa cruz 公司买。或者更简单的方法是直接用SDS-PAGE 的上样buffer去裂解，超声再煮一下就好，核酸不多的话连离心都可以省了，缺点就是不能测蛋白浓度。