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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 做药动血浆前处理回收率低怎么办？
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ghaut

金虫 (初入文坛)

[求助] 做药动血浆前处理回收率低怎么办？

最近刚开始做药动，做的是中药复方中的几个成分，现在面临一个很棘手的问题，回收率低。我用空白血浆加对照品这样做回收率，试过各种方法，包括液液萃取、固相萃取、甲醇沉淀蛋白，回收率最高的也就50%（PS：文献上回收率都很高的，90%以上，不知是不是我的操作有问题？）。由于灌胃的是复方，含量本来就比较低，吸收入血的含量就更低，我每个点取1mL全血，到后面几个点几乎就测不出来了，所以我还是觉得回收率是个大问题，请教各位这种情况怎么办？
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1楼2011-07-24 13:03:02
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by weijie302 at 2011-07-24 16:14:54:
回收率低肯定是你的样品提取有问题了，也不知道你具体做的是那几个中药，都有什么性质。你要从样品性质来总结：比如，你的样品是碱性化合物，用水溶性溶剂提取最好调pH至酸性。净化时推荐SPE，同样，碱性化合物可 ...

其中一个是阿魏酸，我离出血浆来都是先加HCL酸化到PH=3，再进行下面的操作的，固相萃取用过，回收率也不高，而且我把上样流出液、水洗脱液，都做液相了，里面也并没有成分，按说来阿魏酸极性不算小了，应该不会是被吸附了啊，所以一直搞不清楚。另外甲醇沉淀蛋白我也试过，但是由于血药浓度比较低，上清液必须进行浓缩，我用氮吹吹干再用流动相复溶，溶解的总不是很完全，不知这对回收率有没有影响，大家在做的时候都是怎样做的呢？
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3楼2011-07-24 17:11:28
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weijie302

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ghaut(金币+1): 谢谢帮助！ 2011-08-07 11:16:16
回收率低肯定是你的样品提取有问题了，也不知道你具体做的是那几个中药，都有什么性质。你要从样品性质来总结：比如，你的样品是碱性化合物，用水溶性溶剂提取最好调pH至酸性。净化时推荐SPE，同样，碱性化合物可用MCX净化效果比较好。自己总结吧
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2楼2011-07-24 16:14:54
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weijie302

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

ghaut(金币+1): 学习了，谢谢！ 2011-08-07 11:16:49
引用回帖:
Originally posted by ghaut at 2011-07-24 17:11:28:
其中一个是阿魏酸，我离出血浆来都是先加HCL酸化到PH=3，再进行下面的操作的，固相萃取用过，回收率也不高，而且我把上样流出液、水洗脱液，都做液相了，里面也并没有成分，按说来阿魏酸极性不算小了，应该不会 ...

你用的是强阴离子交换MAX的固相萃取柱么？要是阿魏酸酸性太强，是有可能在MAX上产生死吸附的，可以再试试弱阴离子交换WAX固相萃取柱，不过注意一点，最后的洗脱液要用氨化甲醇（氨水:甲醇, 5:100, v/v），这样才能比较好的将阿魏酸洗脱下来。
不过我觉得MAX对阿魏酸产生死吸附的可能性不大，是不是你的洗脱强度不够啊？试过酸化甲醇（甲酸:甲醇, 5:100, v/v）洗脱了么？
注意MAX和WAX的洗脱方式是不一样的，别弄混了。
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4楼2011-07-25 08:23:12
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ghaut

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by weijie302 at 2011-07-25 08:23:12:
你用的是强阴离子交换MAX的固相萃取柱么？要是阿魏酸酸性太强，是有可能在MAX上产生死吸附的，可以再试试弱阴离子交换WAX固相萃取柱，不过注意一点，最后的洗脱液要用氨化甲醇（氨水:甲醇, 5:100, v/v），这样 ...

用的安捷伦的C18小柱，200mg 3mL的，洗脱时用了3mL甲醇，按说来应该可以了啊，而且C18对阿魏酸应该没有死吸附吧...
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5楼2011-07-26 08:17:56
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