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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶反应搅拌问题
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lipeize1995

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶反应搅拌问题 已有1人参与

酶催化的反应，一般都需要通过摇床，使其达到混合均匀
我想请问一下各位高手，我能否在酶催化反应的过程中使用磁力搅拌子呢？这样酶反应会不会失活很严重啊？
谢谢
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-07-21 21:55:37
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 来也 2011-07-22 00:57:40
搅拌对酶催化反应主要作用是将传质均匀混合，增大反应速率：
1，酶对机械搅拌的稳定性。
游离状态的酶对热、强酸、强碱、高离子强度、有机溶剂等稳定性较差，易失活，对机械搅拌没有上述几种因素敏感，但大分子酶、多聚体酶除外，PS:共价多聚体可能好一点，磁力搅拌器的剪切力比较强，对酶活性有一定影响，具体看酶的稳定性，举例来说：工业上为了避免搅拌和其他原因（如上述）带来的酶活损失（常见为游离酶搅拌），采用固定化酶技术，而且不使用游离酶搅拌这种方法，如固定化酶填充床、流化床、膜反应等。
2，并不是所有的酶通过增大搅拌强度催化效率会增加（除了不稳定的多聚体、大分子酶等可能需要间歇性搅拌，其他证据在搜索ing，如果有证据请跟帖，谢谢）。

每种酶都有最适条件，不能一概而论。磁力搅拌器好不好用和你酶的性质关系很大。
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2楼2011-07-22 00:11:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): 来也 2011-07-22 00:57:15
楼主，如果酶的底物是固体，固体沉底，那么搅拌可以增加酶和底物接触的机会。我测定纤维素酶对微晶纤维素和生淀粉酶对生淀粉作用时，由于底物是不溶的，所以在反应过程中摇动和静止测定得到的酶活力是不同的。但如果是CMC和可溶性淀粉就不用摇动，因为底物可溶。

一句话，你的酶是溶解的，要不要搅拌取决于底物是否溶解，但搅拌的速度取决于会不会破坏酶与底物结合。

另外，工业上用的固定化酶并不是为了避免搅拌，而是固定化之后酶的抗逆性会有所提高，能够发挥作用更持久，反应完毕之后易于回收。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-07-22 00:45:01
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): good 2011-07-22 18:37:52
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 00:45:01:
楼主，如果酶的底物是固体，固体沉底，那么搅拌可以增加酶和底物接触的机会。我测定纤维素酶对微晶纤维素和生淀粉酶对生淀粉作用时，由于底物是不溶的，所以在反应过程中摇动和静止测定得到的酶活力是不同的。但如 ...

底物溶解性，底物和酶的接触效果。
考虑问题的角度真是不一样啊~~
固定化酶，我记住了。学习求实的精神！

另外，搅拌速率对酶与底物的结合影响大吗？还是分情况，具体问题具体分析？比如催化大分子和催化小分子。
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4楼2011-07-22 02:30:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-07-22 12:09:50
引用回帖:
Originally posted by gwbk at 2011-07-22 02:30:26:
底物溶解性，底物和酶的接触效果。
考虑问题的角度真是不一样啊~~
固定化酶，我记住了。学习求实的精神！

另外，搅拌速率对酶与底物的结合影响大吗？还是分情况，具体问题具体分析？比如催化大分子和催化 ...

这个问题我不知道，应该从酶与底物结合时候的结构构象和耗能来分析，有底物结合功能域例如CBD和没有结合功能域的应该会不同，功能域不同结合方式的应该会不同（例如生淀粉酶和纤维素酶的结合功能域），分子量大小我没有想过。搅拌也会产生动能，可能使得酶与底物复合物解体。

这个问题太复杂，我不想，我一向怕麻烦。
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5楼2011-07-22 03:52:35
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lipeize1995

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 00:45:01:
楼主，如果酶的底物是固体，固体沉底，那么搅拌可以增加酶和底物接触的机会。我测定纤维素酶对微晶纤维素和生淀粉酶对生淀粉作用时，由于底物是不溶的，所以在反应过程中摇动和静止测定得到的酶活力是不同的。但如 ...

我的底物溶解的话，需不需要进行搅拌啊？
我的酶是三种酶联合使用的
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6楼2011-07-22 12:43:53
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lasteye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): 请教下什么酶不溶解呢？固定化的？谢谢！ 2011-07-22 17:09:01
如果底物和酶都溶解性好，形成均相反应，我想不必搅拌。如果两者之一难溶，则需要搅拌。我做过一个酯酶水解反应，由于底物不溶，需剧烈搅拌，反应进行得很好。楼主可以做个比较实验，投两个微量反应，一个搅拌，另一个不搅拌，看反应进行得怎样，选择较优的条件放大即可。
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愿为“中国创造”倾尽绵薄之力。
7楼2011-07-22 12:56:06
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励交流 热烈啊 2011-07-22 18:38:27
固定化酶确实有不可溶的，例如用壳聚糖固定化的，固定化果糖基转移酶。在催化蔗糖产生低聚果糖的时候为了加快产物扩散开，以免产生产物阻遏，会有一定的搅拌度。这个在我们学校有做。
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8楼2011-07-22 18:26:20
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lasteye

金虫 (小有名气)
我做有机合成用过的几个脂肪酶，在水溶液中不能完全溶解，有不溶性的固体，可能用作有机合成的酶纯度要求不是很高吧，用这样的酶做反应，适度搅拌是必要的。
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愿为“中国创造”倾尽绵薄之力。
9楼2011-07-24 12:33:55
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匿名

用户注销 (正式写手)
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10楼2013-03-29 10:35:24
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