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raulzxcv

木虫 (小有名气)

[求助] 求助!农杆菌侵染霉菌孢子的问题。谢谢大家啦

各位大侠,小妹实验上遇到了困难,请大家帮帮忙呵呵。我最近的实验是农杆菌侵染霉菌孢子,就是农杆菌中的Ti质粒使霉菌基因突变,这是植物病理学上常用的一种方法,我的问题是当农杆菌和霉菌孢子共培养三天后有单克隆长出,然后倒入含有抗生素的霉菌培养基,按理说应该5-6天才会看到霉菌,可是第二天就有菌落出现,而且不是霉菌,第三天的时候满版都长满了黄色的,干燥的东西,也不知道是不是菌,如果是的话,是什么菌?请做过类似实验的虫虫指导一下吧,谢谢啦
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jxcydm

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-20 22:18:55:
应该是染菌了,你注意一下操作吧,好像含抗生素培养基应该在早些倒进去吧,覆盖就行了。应该是在预计你的孢子已经萌发的时间倒进去。然后看能穿过抗性培养基层的认为是转化子,拿去验证

但好像覆盖很容易长出来啊,野生型的也一样,是不是要提高一下筛选浓度啊?
3楼2011-07-21 20:31:26
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

raulzxcv(金币+2): 谢谢啦 2011-07-21 22:13:34
应该是染菌了,你注意一下操作吧,好像含抗生素培养基应该在早些倒进去吧,覆盖就行了。应该是在预计你的孢子已经萌发的时间倒进去。然后看能穿过抗性培养基层的认为是转化子,拿去验证
2楼2011-07-20 22:18:55
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

raulzxcv(金币+2): 谢谢啦 2011-07-21 22:25:29
如果你的抗生素平板的抑制效果有限的话,你害怕覆盖会稀释抗生素浓度,你可以将共培养的孢子涂在膜上,共共培养时间时间过了之后,将膜揭下来,转到抗性板上;如果你的抗性板连野生型的也抑制不住,你有必要提高浓度。
4楼2011-07-21 21:58:40
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raulzxcv

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by anlewo7777 at 2011-07-20 22:18:55:
应该是染菌了,你注意一下操作吧,好像含抗生素培养基应该在早些倒进去吧,覆盖就行了。应该是在预计你的孢子已经萌发的时间倒进去。然后看能穿过抗性培养基层的认为是转化子,拿去验证

先是共培养,共培养的培养基应该是不加抗生素的吧
5楼2011-07-21 22:16:08
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