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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！
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rjghx

新虫 (初入文坛)

[求助] 在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下,提DNA 的高手请进！！！

在DNA提取过程中遇到了困惑，希望朋友们可以解答一下！！！
提取对象为：植物核果的去核干燥果实
方法：CTAB法及SDS法。
药材数量：4g，大量粗提取。
在提取的过程中到没有什么异常出现，但最后一步用乙醇或异丙醇沉淀时，出现了大量胶状沉淀,按常规会判断为多糖，但在电泳后发现板孔附近并没有多糖的亮点，同时DNA的条带也是一点都没有，这个实验我试了很多方法，CTAB法，SDS法，大量提取，微量提取。也参考文献试了很多改良的方法，都没有得到DNA的条带。请问各位有什么高见？
附上照片，用5ml及1.5ml离心管做。
此图分别为用醇沉淀瞬间出现的大量胶状沉淀。
离心沉淀。
用75醇洗涤后转入1.5 离心管。
电泳示意图。
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1楼 2011-07-20 11:03:59
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yuoulvjia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 新朋友很犀利啊！ 2011-08-16 23:26:38
楼主确实65°水浴时间太长了，一般我们这里都是半个小时，没有提出来基因组，很大一部分原因是在这里就降解了，所以后面看起来抽提的很干净，其实DNA已经没有了。而且如果是提取果核的话，建议鲜样现提，而且大量提取的话，CTAB还是比SDS好的多，CTAB法建议用异丙醇沉降。楼主可以多试试，一定行得。加油！！
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14楼2011-08-16 19:25:27
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healerly

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 鼓励交流 2011-07-20 16:27:57
本帖内容被屏蔽
2楼2011-07-20 11:18:35
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rjghx

新虫 (初入文坛)
我用的也有CTAB法，我先用液氮研磨成细粉，大概5-6次，再用提取缓冲液（0.25mol Nacl  ，0.25mol Tris， 50mmol EDTA， 调PH=8.0）冰浴一小时，而后用 2×CTAB提取缓冲液65℃水浴4小时。氯仿异戊醇除杂5次（事实上五次后还有杂质，我试过一直除杂，就一直都有）。无水乙醇加醋酸钾沉淀。
我们用同样的方法对叶子及鲜果提取都有结果，唯独对干燥果实一点用也没有，并且不知道大量出现的胶状沉淀是什么？
附上跑板图，你参谋一下.......
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3楼2011-07-20 16:02:04
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rjghx

新虫 (初入文坛)
我做的也是微量的，只是不出结果，用0.2g的提，跑完后还是空板一张，因为怀疑含量太少，所以就试着用大量的去提取，只求能提出来！
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4楼2011-07-20 16:06:25
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