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libing198968

银虫 (初入文坛)

[求助] RACE实验中的 GC-Rich 问题

大家好,我刚开始做RACE的新兵,我用的是Clontech的SMARTer™ RACE  cDNA Amplification Kit。说明书上提示说GC含量过高,不能得到预期产物,就要用Clontech 提供Advantage GC 2 Polymerase Mix (Cat. No. 639114) and PCR Kit (Cat. Nos. 639119 &639120) 来有效扩增 GC-rich模板。
我想问一下,对于植物而言,GC含量多少以上就算是GC含量过高呢?
还有就是假设预期的GC含量比较高,但真实的GC含量没有那么高,用Advantage GC 2 Polymerase Mix 来扩增会不会更加影响扩增效率呢?
求大侠指点
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nieqiantina

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by guanzhow at 2011-09-27 12:33:23
哪位大侠知道
SMARTer II A Oligonucleotide (12 μM)
5'–AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACXXXXX–3'
(X = undisclosed base in the proprietary SMARTer oligo sequence)
X是哪些碱基, 可以用什么替代 ?
谢谢!

这个不用管,试剂盒里面已经是有的,是公司的秘密的东西,你是要自己做这个?
9楼2014-04-17 11:41:34
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查看全部 15 个回答

taigongzaici

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-07-20 16:29:58
libing198968(金币+2): 谢谢,大家都这么说,可能我用对照RNA都没P出来目的条带,不知道是不是酶的原因,我用的是takara的Taq酶 2011-07-21 11:18:23
Clontech的SMARTer™ RACE  cDNA Amplification Kit很好用,大胆做,按照试剂盒要求,没问题,前提是RNA要过关
2楼2011-07-20 09:44:04
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

楼上说的有道理,关键是RNA质量要过关!
jiayoubashaonian
3楼2011-07-20 09:55:58
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libing198968

银虫 (初入文坛)

我用的是Takara的聚合酶,做了一次对照PCR没有跑出目的条带,是不是一定要用说明书中的Advantage 2 Polymerase Mix试剂盒呢
生活没有彩排,所以任何时候都要好好表现,因为你没有再来一次
4楼2011-07-20 16:14:55
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