应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 问一下蛋白表达中出现的问题~
81/1返回列表
查看: 1704  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

snowice

银虫 (小有名气)

[交流] 问一下蛋白表达中出现的问题~

最近在做蛋白表达跑电泳的时候总在目的条带附近出现一条比较拖尾的条带，其他区域条带都很正常，因为带his标签，所以WB砸了一下，发现诱导前、诱导后全菌、诱导后上清、沉淀均砸出条带，诱导前可能是表达泄露了，因为上清中太少，过了下柱子基本没东西，所以只能洗包涵体，现在想问下各位大牛箭头所指那条有点拖尾的条带是怎么回事，载体是pRSET-A，应该就是我的目的蛋白，因为换别的载体表达也在目的大小出现这样的拖尾条带，请问这影响我纯化吗，打抗体用？

图中从第二张图从左到右到第一张图为诱导前全菌、诱导4h全菌、上清、沉淀，一共挑了7个单克隆。
谢谢各位啦~~

[ Last edited by snowice on 2011-7-18 at 00:40 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-07-17 00:01:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-07-17 20:23:27
没看出你的目标蛋白在哪里
别跟我说是那个最下面的那条
那条是的可能性小，诱导前就有了
wb用的啥抗体，针对啥的
还有  photoshop学起来，起码标识要有
最起码 旋转180度这个总要吧，毕竟从左到右习惯了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-07-17 07:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
不好意思，his是哪个公司的，平常做其他his的话，那个带位置有杂带不？
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-17 07:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2011-07-17 07:53:23:
没看出你的目标蛋白在哪里
别跟我说是那个最下面的那条
那条是的可能性小，诱导前就有了
wb用的啥抗体，针对啥的
还有  photoshop学起来，起码标识要有
最起码 旋转180度这个总要吧，毕竟从左到右习惯了

嗯 不好意思，昨晚发的太晚了 没来的及好好整 就是倒数第二条marker附近那条比较拖得带，我觉得可能就是那个，因为换了GST的大标签也会在预测的大小附近出现拖得更厉害的条带；诱导前有可能是表达泄露了吧，改天做个空质粒对照看看好了；
您能告诉我为啥那条带会拖吗，因为其他带都是正常的，所以有点不明白，蛋白酶抑制剂啥的都加了的；
his 的抗体是sigma的，应该没问题，砸出条带也很单一
赞一下 回复此楼
4楼2011-07-17 23:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yang0071 at 2011-07-17 07:54:57:
不好意思，his是哪个公司的，平常做其他his的话，那个带位置有杂带不？

您好，图片已改，请问下疑似目的条带拖尾是怎么回事呢？多谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-18 00:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
最好有wb的图作参考，更好判断一些
目前可能性，1   表达量不错，蛋白很多，所以拖尾
            2   产生剪切体，但是没有wb不好判断
不管哪种基本上  表达出来了
至于纯化，应该可以。
打抗体，未知。 存在于沉淀中，看你复性的情况了，打是可以打，就是出来是不是能用于wb还是ip的问题了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-07-18 08:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
原核蛋白表达纯化试验中，目的蛋白拖尾一般是有样品量过大或溶解效果不佳引起的，一般不会对实验结果造成影响；包涵体蛋白复性中His标签很小且免疫原性很低，可以直接打抗体。
赞一下 回复此楼
7楼2015-02-12 13:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我去ヾ(｡｀Д′｡，没注意，陈年老贴啊
赞一下 回复此楼
8楼2015-02-12 13:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 snowice 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +6 koalala 2026-08-24 6/300 2026-08-24 08:21 by 正能量1斤
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭