24小时热门版块排行榜

返回列表

snowice

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 300.6
帖子: 143
在线: 70.3小时
虫号: 996623

[交流] 问一下蛋白表达中出现的问题~

最近在做蛋白表达跑电泳的时候总在目的条带附近出现一条比较拖尾的条带，其他区域条带都很正常，因为带his标签，所以WB砸了一下，发现诱导前、诱导后全菌、诱导后上清、沉淀均砸出条带，诱导前可能是表达泄露了，因为上清中太少，过了下柱子基本没东西，所以只能洗包涵体，现在想问下各位大牛箭头所指那条有点拖尾的条带是怎么回事，载体是pRSET-A，应该就是我的目的蛋白，因为换别的载体表达也在目的大小出现这样的拖尾条带，请问这影响我纯化吗，打抗体用？

图中从第二张图从左到右到第一张图为诱导前全菌、诱导4h全菌、上清、沉淀，一共挑了7个单克隆。
谢谢各位啦~~

[ Last edited by snowice on 2011-7-18 at 00:40 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球已经有8人回复
自荐读博已经有7人回复
自然科学基金委宣布启动申请书“瘦身提质”行动已经有4人回复
求个博导看看已经有18人回复
青基代表作，AAAI之类的A会的special track在国内认可度高吗？还是归为workshop之流？已经有3人回复
上海工程技术大学【激光智能制造】课题组招收硕士已经有6人回复
上海工程技术大学张培磊教授团队招收博士生已经有4人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

有关蛋白表达的问题已经有25人回复
目的蛋白表达的问题已经有20人回复
关于蛋白表达的问题已经有3人回复
膜蛋白表达问题已经有15人回复
关于蛋白重组表达的问题已经有6人回复
【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题已经有12人回复
【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题已经有10人回复
【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！已经有7人回复
【求助/交流】跨膜蛋白表达问题已经有6人回复
【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题已经有9人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-07-17 00:01:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

BioEPI: 2
应助: 207 (大学生)
金币: 1573.4
帖子: 4041
在线: 647.7小时
虫号: 50941

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-07-17 20:23:27

没看出你的目标蛋白在哪里
别跟我说是那个最下面的那条
那条是的可能性小，诱导前就有了
wb用的啥抗体，针对啥的
还有 photoshop学起来，起码标识要有
最起码旋转180度这个总要吧，毕竟从左到右习惯了

赞一下(2人)

回复此楼

2楼2011-07-17 07:53:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

BioEPI: 2
应助: 207 (大学生)
金币: 1573.4
帖子: 4041
在线: 647.7小时
虫号: 50941

不好意思，his是哪个公司的，平常做其他his的话，那个带位置有杂带不？

赞一下

回复此楼

3楼2011-07-17 07:54:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

snowice

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 300.6
帖子: 143
在线: 70.3小时
虫号: 996623

引用回帖:

Originally posted by yang0071 at 2011-07-17 07:53:23:
没看出你的目标蛋白在哪里
别跟我说是那个最下面的那条
那条是的可能性小，诱导前就有了
wb用的啥抗体，针对啥的
还有 photoshop学起来，起码标识要有
最起码旋转180度这个总要吧，毕竟从左到右习惯了

嗯不好意思，昨晚发的太晚了没来的及好好整就是倒数第二条marker附近那条比较拖得带，我觉得可能就是那个，因为换了GST的大标签也会在预测的大小附近出现拖得更厉害的条带；诱导前有可能是表达泄露了吧，改天做个空质粒对照看看好了；
您能告诉我为啥那条带会拖吗，因为其他带都是正常的，所以有点不明白，蛋白酶抑制剂啥的都加了的；
his 的抗体是sigma的，应该没问题，砸出条带也很单一

赞一下

回复此楼

4楼2011-07-17 23:45:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖