24小时热门版块排行榜    

查看: 1874  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mengfei2050

铜虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带,请教高手!谢谢!

我从sigma买的脂肪酶pfl,昨天做了SDS-PAGE,电泳的结果是marker和其他人的发酵液提取的蛋白都有条带,就我的样一条也没跑出来。
我对样品的处理方法是:
用缓冲溶液配制酶的溶液,酶浓度0.001--5 mg/mL一共五六个浓度。
上样的时候直接10uL酶溶液加10uL巯基乙醇混合。
求原因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

comeon
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)

引用回帖:
1615185楼: Originally posted by tomorrowhl at 2012-05-15 16:04:15:
我用细菌胞外产物跑PAGE,要不是没有条带,要不是模糊的条带,maker和样品的泳道挨着就会被及变形,样品的泳道很宽,差不多是两个用到那么款。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从 ...

最好是上传一下图片!
7楼2012-05-15 21:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:08
应该先配上样缓冲液吧,5ml的5×SDS-PAGE的配方:1mol/l  Tirs-HCl(PH6.8) 1.25ml,SDS  0.5g,甘油   2.5ml,溴酚兰 25mg,加去离子水溶解定容至5ml,每份500微升分装后室温保存,使用前将25微升的2-ME加到每小分中。
样品跟上样缓冲液按4:1混合后,沸水煮5min再上样
2楼2011-07-16 15:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:14
mengfei2050(金币+3): 2011-07-18 08:44:12
你的蛋白变性了没啊?先跟上样缓冲液混匀 煮沸5min 或者97℃ 5min 变性
-20℃或-80℃保存 下次上样前95℃ 5秒 再充分混匀上样
3楼2011-07-16 15:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengfei2050

铜虫 (正式写手)

我的样品没有煮沸,不煮沸有什么影响吗?
comeon
4楼2011-07-16 16:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天大材料与化工(085600)总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀~
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +3 ydfyh 2026-03-17 3/150 2026-03-19 10:14 by 功夫疯狂
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[考研] 求材料调剂 +10 隔壁陈先生 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:15 by 无际的草原
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
请填处理意见