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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ELISA TMB显色液怎么配制？我配的怎么一混合就浑浊了？
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jianglay

新虫 (初入文坛)

[求助] ELISA TMB显色液怎么配制？我配的怎么一混合就浑浊了？已有2人参与

按以下配方配制了TMB显色液：
A液：将TMB粉溶于DMSO中使终浓度为11mg/ml，再加入1/10体积的甘油（全部避光操作，然后装入黑瓶避光4度保存）
B液：pH5.5   0.2 mol／L磷酸氢二钠与0.1 moL／L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg／mL的溶液。
使用时用B将A稀释50倍混合使用，但是问题来了一混合就出现了絮状沉淀，而且显色比较淡
跪求指点~~谢谢~
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喔列打击哇刚大木达
1楼2011-07-14 14:25:28
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liuyuncun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-07-15 12:33:29
jianglay(金币+2): 按你的方法做颜色很淡啊 2011-07-18 19:12:11
给你个简单的吧  国标上的
1.底物溶液:取50μL TMB(10mgTMB溶于1mLDMSO中)溶液+10mL底物缓冲液
+10μL30%过氧化氢，混匀。
2. 底物缓冲液  pH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液，配制方法为:
0.1mol/L柠檬酸C6H8O7•H2O)，即称取柠檬酸19.2g，加水至1000mL，为甲液;
0.2mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4),即称取磷酸氢二钠71.7g,加水至1000mL，为乙液;
取甲液24.3mL，乙液25.7mL，加水至100mL，即可
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学到老 活到老
6楼2011-07-15 07:58:14
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liuyuncun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

jianglay(金币+1): 打算重新买TMB再试一下了，10mg溶于1ml DMSO已经算很多了 2011-07-21 23:24:47
你按照我说的配制方法做过了吗？如果颜色浅的话你可以加大TMB的量，我说的是取50μL TMB(10mgTMB溶于1mLDMSO中)，你可以加大到200或500μL 试试 祝实验顺利
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学到老 活到老
9楼2011-07-21 21:30:56
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liuyuncun

金虫 (小有名气)
对了  你说你的颜色浅 OD值大约在多少啊？可以把你的其他试剂的稀释比说一下吗？也可能不是底物的原因啊？你用ELISA什么模式测什么东西呢？
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学到老 活到老
10楼2011-07-21 21:34:10
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