应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教一下构建、表达方面的问题
51/1返回列表
查看: 4312  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yanjun3830

木虫 (正式写手)

[求助] 请教一下构建、表达方面的问题

为什么我构建的菌种只表达标签GST而不表达目的蛋白，想请教一下高手出现这种情况的原因会是什么呢？会不会是没连上，但是酶切鉴定还是好的啊！望这方面的高手给予指教，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
生活有时很无奈！
1楼 2011-07-12 10:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
本帖仅楼主可见
赞一下

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yanjun3830
10楼2011-07-14 21:17:37
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
查看全部 14 个回答

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 很专业了 2011-07-12 19:30:20
yanjun3830(金币+10): 谢谢，很不错的解答！ 2011-07-13 08:58:43
1、你是否确定你构建的载体是完全正确地，只靠酶切验证时不够的，做PCR验证，再测序。
2、你连接上的这个基因片段用表达载体上的启动子可以启动表达吗？如果不可以，要克隆出这个基因自身的启动子，构建到表达载体上。
3、有些蛋白的表达可能需要很多因素，例如是否要加诱导剂、是否要低温表达等。

由于我只是以前看同学做过蛋白表达，这些原因也是同学碰到过的，所以只能给你提供这些建议了，仅供参考。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yanjun3830
2楼2011-07-12 12:44:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-12 19:30:49
yanjun3830(金币+5): 谢谢！ 2011-07-13 09:00:56
1.宿主菌合适吗？会不会，把你的外源基因表达产物降解，或者有抑制其表达的因素。
2。考虑下目的基因的表达量，检测方法的准确及精确性。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

yanjun3830
坚持，一秒钟，就离，成功，近一步！
3楼2011-07-12 12:57:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjun3830

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
Originally posted by 足下客 at 2011-07-12 12:44:53:
1、你是否确定你构建的载体是完全正确地，只靠酶切验证时不够的，做PCR验证，再测序。
2、你连接上的这个基因片段用表达载体上的启动子可以启动表达吗？如果不可以，要克隆出这个基因自身的启动子，构建到表达载 ...

上游引物是当初构建此蛋白的半分子的引物，半分子构建成功后表达量还是很不错的，现在只是把下游引物换成了全分子的引物，其他的都没变，可是构建了好几次都不表达目的蛋白，光表达GST。差不多花费了两个月了，烦人的很，学化学的人做生物真是伤不起啊！
赞一下 回复此楼
生活有时很无奈！
4楼2011-07-13 08:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 30/1500 2026-08-14 07:55 by 医学老男孩
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭