24小时热门版块排行榜    

查看: 2023  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] 单酶切,酶连之后验证问题

请教各位一个问题,因为智力上面没有合适的酶切位点,在质粒上面再加一个抗性基因的话需要设计一个单酶切酶连的位点,这个抗性基因很小,大概300左右bp,酶切验证的话跑胶的话会不是很清楚,请问可以做PCR验证吗?要是反接的话会不会也P出来目的基因?先谢过了!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

上班族,学习ing……
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ybs007

金虫 (小有名气)


adslye(金币+1): 鼓励新虫~~祝顺利! 2011-08-06 07:57:54
我也是新手,我弱弱的问一下,会出现反接的问题么?质粒是环状的哦。。。
平生我自知
3楼2011-07-16 20:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhmdddd(金币+5): 知道了,十分感谢! 2011-07-11 11:14:20
lstt09nk(金币+2): 感谢交流,欢迎常来 2011-07-17 20:40:54
加抗性基因的话  一定要注意抗性基因的启动子一起加进去,这样不管是正接还是反接  ,都可以用。
300BP的酶切  质粒多加一点,其实是可以看出来的,用2%的胶,应该没问题。
PCR验证的话,反着接也是可以P出来的。
2楼2011-07-11 10:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dhmdddd

木虫 (正式写手)

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-08-06 07:58:36
引用回帖:
Originally posted by ybs007 at 2011-07-16 20:34:47:
我也是新手,我弱弱的问一下,会出现反接的问题么?质粒是环状的哦。。。

你是单酶切的话,质粒线性化,就不是你说的环状的了,切了后两端都是相同的酶切位点,你要连的目的基因两端也是相同的酶切位点,所以你的目的基因有可能是正着,按着它编码转录翻译的顺序接上去,也有可能是反着接上去,反着话后面是不表达的,所以单酶切要验证正反接的!不知道我说明白没有……
上班族,学习ing……
4楼2011-07-17 12:11:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuhedong1817

木虫 (正式写手)

hello


adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利~ 2011-08-06 07:59:11
嗯,如果是双酶切的话,就不会出现反接这种情况了!
老婆的头像
5楼2011-07-17 15:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见