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青菜小虫银虫 (著名写手)
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构建全长cDNA中连接的问题
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各位朋友： 我现在要构建全长的cDNA，全长是15186bp，分为12个目的片段。分别连在T载体上了。设计了一系列的酶切连接方案，要连到 PMC18 质粒上，这是一个低拷贝的质粒。现今T载体上和PMC18 上各连了3个目的片段，另外一个PMC18 连接了2个目的片段，可之后的连接之路依旧很艰难。请求朋友们给点好的连接方法，想法。多谢！ |
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6楼2011-07-14 17:30:44
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2楼2011-07-09 12:24:23
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3楼2011-07-09 14:21:52
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
青菜小虫(金币+2): 我就是这么做的啊，我现在有3个同步的质粒，顺序就是1234,7896,101112分别连。我的困惑是现在目的片段往每一个质粒上连接都很艰难，连不上了。 2011-07-09 16:08:16
dhd997(金币+2): good 2011-07-09 18:17:38
青菜小虫(金币+1): 谢谢帮助。 2011-07-11 14:15:50
西瓜(金币+2): Good!补上EPI！ 2011-07-13 22:52:38
西瓜(EPI+1): 连楼下一起 2011-07-15 17:46:13
青菜小虫(金币+2): 我就是这么做的啊，我现在有3个同步的质粒，顺序就是1234,7896,101112分别连。我的困惑是现在目的片段往每一个质粒上连接都很艰难，连不上了。 2011-07-09 16:08:16
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青菜小虫(金币+1): 谢谢帮助。 2011-07-11 14:15:50
西瓜(金币+2): Good!补上EPI！ 2011-07-13 22:52:38
西瓜(EPI+1): 连楼下一起 2011-07-15 17:46:13
| 把12个片段尽量按顺序分成3-4组同时去连载体，如果酶切位点设计的足够合理的话不按顺序也没什么问题。等这3-4个都验证正确后再互连。 |
4楼2011-07-09 15:52:53
30