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happywoheni铁虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】基因克隆T载体酶切问题等
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求助啊，本人纯属菜鸟，问题较多，请大家帮帮忙！ 1：引物中添加的限制性酶切位点是选择T载体上有的还是没有的？完全不懂！ 2：我做基因克隆，用的上游引物5‘加了BamH1酶切位点，下游引物5’加了EcoR1酶切位点,可以用宝生物的pmD-19 T载体吗？ 3：我现在做pcr产物的纯化，想问一下，下一步T载体和pcr产物都要经过双酶切之后，再连接吗？还是T载体可以不用双酶切，只是pcr产物双酶切？还是其他？ 4：pcr产物可以直接双酶切吗，酶切缓冲液用哪一种，温度一个是30度一个是37度。 5：如果T载体不用酶切，直接连，酶切鉴定作用是什么？怎么做？用这两种限制性内切酶切吗？切完之后是不是有很多段？ 5：蓝白斑筛选操作步骤 在线等，急…… |
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